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簡介：復旦大學博士學位論文桿狀病毒復制和基因表達的表觀遺傳學調(diào)控研究姓名王鑫申請學位級別博士專業(yè)微生物學指導教師鐘江20100412復旦大學博士學位論文桿狀病毒復制和基因表達的表觀遺傳學調(diào)控研究甲基化修飾實驗表明DNA甲基化可以抑制拓D表達。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑DNMTIDAC50RIM的存在有助于維持IEO啟動子低甲基化，并顯著增BNIEO的表達。這些研究結果證實啟動子區(qū)域的DNA甲基化是LEO在感染晚期轉(zhuǎn)錄下調(diào)的原因，表明DNA甲基化在裂解性復制病毒基因表達的調(diào)控中也有重要作用。為了全局性的了解DNA甲基化調(diào)控在病毒復制和基因轉(zhuǎn)錄中的作用，我們還研究了DAC對病毒復制和基因轉(zhuǎn)錄的影響。用50RIMDAC處理，可使AEMNPV感染SF9細胞時病毒效價下降到對照的1／30，并顯著地延遲病毒DNA復制。DAC處理對病毒極早期基因的表達在感染后不同階段有不同的影響。在2HPIDAC可以提高病毒極早期基因IEL和IE2的表達，而在感染晚期，DAC抑制把J『和IE2的轉(zhuǎn)錄。但是在整個復制周期中，DAC都提高LEO的轉(zhuǎn)錄。DAC對病毒滯早期基因轉(zhuǎn)錄的影響不均一，但抑制晚期基因的轉(zhuǎn)錄。DAC對病毒極晚期啟動子的活性的抑制作用尤為明顯。對于DAC抑制極晚期啟動子的機制我們進行了進一步的研究，發(fā)現(xiàn)用質(zhì)粒額外表達IEL可以緩解DAC的對極晚期啟動子的抑制作用。這些數(shù)據(jù)，結合前面的結果和對IE0，IEL功能已有的認識，提示在感染的后期，DAC是通過抑制把珀Q轉(zhuǎn)錄，同時避免LEO轉(zhuǎn)錄的降低，改變了IEO，IEL兩個蛋白的相對比例，從而抑制了極晚期啟動子的激活。這一研究結果表明DNA甲基化對病毒復制的調(diào)控作用可能主要是通過影響關鍵調(diào)控因子的轉(zhuǎn)錄來實現(xiàn)。除了感染昆蟲細胞以外，桿狀病毒還能高效地侵入多種哺乳動物細胞。它作為一種新型哺乳動物轉(zhuǎn)導載體正在受到越來越多的重視。但目標基因的表達沉默限制了桿狀病毒這方面的應用。盡管人們早已發(fā)現(xiàn)組蛋白去乙?；D(zhuǎn)移酶抑制劑可以提高桿狀病毒介導的基因在哺乳動物細胞中的表達，但另一類引起表觀遺傳學修飾變化的藥物，DNMTI卻被報道沒有這種效果。在本論文中，我們首次發(fā)現(xiàn)在病毒轉(zhuǎn)導哺乳動物細胞前使用DNMTIAZA或DAC處理細胞，在多種哺乳動物細胞中桿狀病毒介導的基因的表達水平均有四倍的提高；但如果添加藥物的時問推遲，則其提高表達水平的作用會減弱乃至消失。同時在病毒接種期間有DNMTI的存在對其發(fā)揮作用至關重要。進一步的結果表明DNMTI可能是通過抑制細胞對病毒DNA降解起作用。這項研究為提高桿狀病毒載體在哺乳動物細胞中應用的效果提供了新途徑，也為揭示桿狀病毒與哺乳動物細胞的作用關系，認識哺乳動物細胞對非特異性入侵物的反應及機理提供了新的數(shù)據(jù)。關鍵詞桿狀病毒，表觀遺傳學，組蛋白修飾，DNA甲基化

簡介：L16332分類母UOC密叛公開蝻O女LⅢ2咿幽撼嚳碩士學位論文基于生物信息學的病毒候選PREMIRNA的預測及其平臺的建立學位申請人一導師姓名覆職稱專業(yè)名稱韋榮昌王殉章羲捷信怠生抽學二OO七年十二月一韋榮昌中山大學碩士學位論文2007年11月基配對率與4個過濾功能模塊各自對搜索結果的靈敏性和特異性的影響。然后，本研究深入分析搜索EBV礙到的45條候選PREMIRNA在基因組中的位置，從而得到6條可能性最大但目前還沒有實驗證明的PREMIRNA。最后本研究利用PERL和PHP語言編寫了一個界面簡單并且操作方便的網(wǎng)上預測平臺V蛔LCANDIDATEPREMIRNAPREDICTOR。該平臺的WEB地址為HTTP／／BIOINFOSVSUEDUEN／MIRNA／PREMIRNAPHP。關鍵詞生物信息學，病毒，PREMIRNA，預測，SRNALOOPⅡ

簡介：中國藥品生物制品檢定所碩士研究生學位論文中國藥品生物制品檢定所碩士研究生學位論文仙臺病毒載體基因治療藥物的質(zhì)量控制研究及仙臺病毒載體介導HSV2靶基因的免疫學效果研究姓名付志浩仙臺病毒載體基因治療藥物的質(zhì)量控制研究及仙臺病毒載體介導HSV2靶基因的免疫學效果研究姓名付志浩學號845030610010201學號845030610010201專業(yè)免疫學專業(yè)免疫學導師姓名王軍志研究員導師姓名王軍志研究員指導教師饒春明研究員指導教師饒春明研究員李永紅副研究員李永紅副研究員二00九年七月二00九年七月中國藥品生物制品檢定所碩士學位論文1仙臺病毒載體基因治療藥物的質(zhì)量控制研究及仙臺病毒載體介導HSV2靶基因的免疫學效果研究仙臺病毒載體基因治療藥物的質(zhì)量控制研究及仙臺病毒載體介導HSV2靶基因的免疫學效果研究研究生付志浩導師王軍志研究員摘要摘要仙臺病毒（SENDAIVIRUSSEV）屬于副粘病毒科呼吸道病毒屬，基因組為不分節(jié)段的單負鏈RNA，編碼NP，P，M，F(xiàn)，HN，L等11個蛋白。應用仙臺病毒改造的F基因缺失型仙臺病毒載體（SENDAIVIRUSVECTSEV）是新興的RNA病毒載體，由于其宿主范圍廣、表達量高、胞質(zhì)表達、安全性好等諸多優(yōu)點，目前廣泛用于基因治療藥物和疫苗研究。本課題上篇為針對一種仙臺病毒基因治療產(chǎn)品（攜帶HFGF2外源基因的F基因缺失型仙臺病毒，SEVHFGF2DF）及其包裝細胞庫（導入F基因的恒河猴腎細胞，LLCMK2F）的質(zhì)量控制研究。其中產(chǎn)品質(zhì)量控制研究主要包括結構確認、純度、病毒滴度、體外表達和生物學活性以及特殊殘留物質(zhì)檢測，在該部分的研究過程中，建立了兩個易于標準化和精確度較高的方法，其中一項為“應用流式細胞術檢測病毒載體類基因治療藥物感染滴度”，該方法通過建立適合病毒感染細胞特點的數(shù)學模型和相應操作流程，并確定了方法質(zhì)控指標，結果證實該數(shù)學模型適合病毒感染細胞的特點，所得結果重現(xiàn)性良好。另一項方法學研究為“應用PICOGREEN熒光法檢測DNA殘留”，通過加標回收率對結果進行校正，證實該方法較傳統(tǒng)的斑點雜交法定量準確，且操作簡便，靈敏度高。細胞庫的質(zhì)量控制研究主要包括細胞鑒別，內(nèi)外源病毒因子檢測，逆轉(zhuǎn)錄酶檢測等。其中細胞鑒別實驗藥典三部無明確方法細則，本部分方法學研究通過DNA指紋圖譜、同工酶檢測和細胞表面F蛋白檢測，從遺傳，生化酶學以及重組細胞目的蛋白三方面對細胞進行有效鑒別。課題的下篇為仙臺病毒載體介導Ⅱ型單純皰疹病毒（HSV2）靶基因的免疫學效果研究，首先選取HSV2的糖蛋白D（GD）和核蛋白ICP27由課題合作方日

簡介：石河子大學碩士學位論文河北與山東省嚙齒動物中漢城病毒的分子流行病學研究姓名郭文平申請學位級別碩士專業(yè)生物化學與分子生物學指導教師張永振20100501河北與山東省嚙齒動物中漢城病毒的分子流行病學研究IIABSTRACTOBJECTIVESTOGAINMEINSIGHTSINTOTHEMOLECULAREPIDEMIOLOGYOFSEOULVIRUSSEOVINHEBEISHONGPROVINCEOFCHINA，DISCUSSTHEIGINATIONTHEREASONWHICHLEADTOSEOVAROUNDTHEWLDMETHODSRODENTSWERECAPTUREDINTHEMAINEPIDEMICAREASHANTAVIRUSANTIGENSINRODENTS’LUNGSWEREDETECTEDBYINDIRECTIMMUNEFLUESCENCEASSAYIFAPARTIALSPARTIALGCCOMPLETESMSEGMENTSWEREAMPLIFIEDINANTIGENPOSITIVESAMPLESPATIENTSERUMSAMPLESINACUTESTAGEBYRTPCRWEEXTRACTEDTHETOTALDNAOFRNVEGICUSAMPLIFIEDTHECYTBDNASTARPAUP40WEREUSEDFPHYLOGEICANALYSISOFTHERESULTSRESULTSSEOVSPECIFICANTIGENWASIDENTIFIEDIN20OUTOFTHE803RODENTSCOLLECTEDINTHEMAINHFRSEPIDEMICAREASOFHEBEIPROVINCETHEPOSITIVERATEIS249SEOVSPECIFICANTIGENWASIDENTIFIEDIN8OUTOFTHE267RODENTSCOLLECTEDINTHEMAINHFRSEPIDEMICAREASOFSHONGPROVINCETHEPOSITIVERATEIS3THESPECIESOFSEOVSPECIFICANTIGENRODENTSINCLUDEDRNVEGICUSMMUSCULUSCBARABENSISCTRITONS27PARTIALS30PARTIALGCSEGMENTSWEREAMPLIFIEDSUCCESSFULLY20FULLS17FULLMSEGMENTSWEREAMPLIFIEDSUCCESSFULLYFROMTHEANTIGENPOSITIVESAMPLESTHEGEICPHYLOGEICANALYSISOFTHEPARTIALSNT600999G2NT20032302COMPLETESCOMPLETEMSEGMENTSINDICATEDTHATALLHANTAVIRUSESINTHEHANTAVIRUSPOSITIVESAMPLESPATIENTSERUMSAMPLESARESEOULVIRUSSEOVTHESEVARIANTSFROMHEBEIPROVINCESHONGPROVINCEWERECLASSIFIEDINTOTHEFIRSTTHIRDSUBTYPEOFSEOVRESPECTIVELYTHEMAINEPIDEMICSUBTYPEINHEBEIPROVINCEISTHETHIRDSUBTYPETHEMAINEPIDEMICSUBTYPEINSHONGPROVINCEISTHEFIRSTSUBTYPETHEVARIANTFROMPATIENTINHEBEIPROVINCEBELONGEDTOTHETHIRDSUBTYPEVARIANTFROMPATIENTINSHONGPROVINCEBELONGEDTOTHEFIRSTSUBTYPEWHICHISINACCDANCEWITHTHEVARIANTSCARRIEDBYRODENTSINHEBEIPROVINCESHONGPROVINCERESPECTIVELYAREASSTANTSTRAINISOLATEDFROMRNVEGICUSWASFOUNDINHEBEI40CYTBSEQUENCESWEREAMPLIFIEDSUCCESSFULLYFROM13PROVINCESONTHETREEBASEDONCYTBRNVEGICUSVARIANTSWERECLASSIFIEDINTOONECLUSTERINCLUDINGALLSEQUENCESRECOVEREDINTHEPRESENTSTUDYTHOSERECOVEREDFROMUSAVIETNAMSWEDENDENMARKJAPANTHEGEICHOMOLOGYBETWEENTHISCLUSTERWAS9750CONCLUSIONSTHERESULTSINDICATEDTHATSEOVWASEPIDEMICWIDELYINHEBEIPROVINCESHONGPROVINCEVARIANTSINTHESETWOPROVINCESBELONGEDTOTHEFIRSTTHIRDSUBTYPEWEREDIVERSIFIEDGEICALLYMANYSPECIESOFRODENTSCANCARRIEDSEOVINCLUDINGRNVEGICUSMMUSCULUSCBARABENSISCTRITONSREASSTMENTCANOCCURREDBETWEENDIFFERENTSUBTYPETHESEVARIANTSINTHISSTUDYSHAREDTHECONGRUENTGEICACTERISTICSWITHTHEVACCINESTRAINSZ37THUSTHEBIVALENTVACCINEINCLUDINGTHESTRAINZ37CANBEEFFECTIVELYPREVENTHFRSSEOVMAYBEIGINATEDFROMCHINAINTHELATESTHUNDREDSOFYEARSTHEWIDESPREADOFRNVEGICUSFOLLOWINGHUMANACTIVITIESMAYLEADTOITSPRESENTWIDEGEOGRAPHICDISTRIBUTIONINCHINAEVENWLDWIDEDISTRIBUTIONSEOVCARRIEDBYRNVEGICUSWASDISTRIBUTED

簡介：遼寧師范大學碩士學位論文復合型非病毒載體的構建及其生物學性能研究姓名郝曉敏申請學位級別碩士專業(yè)動物細胞指導教師金梅20100401復合型非病毒載體的構建與其生物學性能研究IITHESYNTHESIZEDOFCOMPLEXNONVIRALVECORANDTHESTUDYOFITSBIOLOGICALPROPERTIESABSTRACTCATIONICLIPOSOMESISSENSITIVEFORANIONICPOLYELECTROLYTEANIONITCANTRANSFERCHARGEDDNAINTOCELLSHIGHNEGATIVELYBUTALSOTRANSFERRNA,RIBOSOMAL,LARGECHARGEDMOLECULESANDOTHERMACROMOLECULESTHETRANSFECTIONEFFICIENCYISMANYTIMESHIGHERTHANOTHERLIOOSOMESHOWEVER,THETRANSFECTIONEFFICIENCYOFCATIONICLIPOSOMES,COMPAREDWITHTHEVIRALVECTOR,ISLESSEFFICIENT,ANDITHASCELLCYTOTOXICITYCATIONICLIPIDSSYNTHESIZEDBYOURGROUPWEREPREPAREDINTOLIPOSOMESWITHDIFFERENTADDITIVESTHEABILITYOFCOMPLEXINGOFLIPOSOMESANDPDNAWEREANALYZEDTHETRANSFECTIONEFFICIENCYANDCELLCYTOTOXICITYINVITROARESTUDIEDCATIONICLIPOSOMESWEREPREPAREDBYTHINFILMULTRASONICTECHNIQUETHECONDENSATIONOFPLASMIDDNAPGFPN2WASSTUDIEDTHROUGHAGAROSEGELELECTROPHORESISANDTHEMORPHOLOGYWASANALYZEDBYATOMICFORCEMICROSCOPEAFMTHETRANSFECTIONEFFICIENCYOFLIPOPLEXOFHEP2CELLSWASOBTAINEDBASEDONGREENFLUORESCENTPROTEINGFPEXPRESSIONBYINVERTEDFLUORESCENTMICROSCOPYUSINGLIPOFECTAMINE2000ANDDOTAPASCONTRASTTRANSFECTIONCONDITIONSWEREOPTIMIZEDANDTHECELLTOXICITYWASEVALUATEDUSINGMTTASSAYTHECOMPLEXINGABILITYWASENHANCEDBYADDINGLITTLEOREQUIMOLARDOPE,BUTDESCENDTHECOMPLEXINGABILITYISNOCHANGEBYADDINGSUCROSEESTERANDINCREASEDOBSVIOUSLYAFTERADDINGCHITOSANCHITOSANTRANSFECTIONEFFICIENCYWASDECREASEDAFTERADDINGSUCROSEESTER,INCREASEDAFTERADDINGDOPEANDCANINCREASEDOBSVIOUSLYAFTERADDINGCHITOSANAFTERVACUUMDRYINGWECOULDOBSERVETHEAPPEARANCEOFTHESAMPLEPARTICLESBYATOMICFORCEMICROSCOPYCATIONICLIPOSOMESFORMEDINTHEMICAPARTICLESWERESPHERICALOROVALSHAPE,ANDTHEIRDISTRIBUTIONWASMOREUNIFORMCATIONICLIPOSOME/DNACOMPLEXESONMICAPARTICLESWEREIRREGULARSHAPE,THEIRDISTRIBUTIONWASUNEVENANDLARGERCOMPAREDWITHBLANKLIPOSOMESCHITOSANMODIFIEDLIPOSOME/DNACOMPLEXESPARTICLESIZEBECOMELARGER,ANDTHESHAPEISMOREIRREGULARADDINGSUCROSEESTERANDDOPE,THETRANSFECTIONEFFICIENCYBECOMEHIGHERTHETRANSFECTIONEFFICIENCYOFCHITOSANMODIFIEDLIPOSOMEHASIMPROVEDSIGNIFICANTLYBUTTHEMTTCYTOTOXICITYHASSHOWNTHATADDINGDOPEANDCHITOSANINTOLIPOSOMESREDUCEDCYTOTOXICITY,WHILEADDINGSUCROSEESTERSLIPOSOMESINCREASEDCYTOTOXICITY

簡介：表達產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌STAK99融合蛋白重組腺病毒載體的免疫學評價IMMUNOGENICITYOFRECOMBINANTADENOVIRALVECTOREXPRESSINGSTAK99FUSIONPROTEINOFENTEROTOXIGENICESCHERICHIACOLIINMOUSE選題來源國家自然科學基金項目NO31060335國家科技支撐計劃項目NO2012BADL28074指導教申請學位門類級別堡堂亟論文完成時間2Q壘生壘月名方學業(yè)究在專研所摘要背景產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌ENTEROTOXIGENICESCHERICHIACOLI，ETEC是全球性的引起新生犢牛、羔羊和新生仔豬／斷奶仔豬嚴重水樣腹瀉的主要病原，給畜牧業(yè)造成巨大損失。在發(fā)展中國家，ETEC也是引起兒童和旅游者腹瀉的重要病原，成為人類公共衛(wèi)生安全的重要威脅。黏附素ADHESIONTL腸毒素ENTEROTOXINS作為ETEC兩類主要毒力因子通常作為產(chǎn)腸毒素性火腸桿菌疫苗研究的優(yōu)勢抗原。腺病毒因其具有安全性好、感染能力強、蛋白表達量高等優(yōu)點，已成為新型疫苗的理想載體【91。目前利用腺病毒載體疫苗對腸道傳染病的免疫效果研究還未見詳細報道，尤其在預防由ETEC引起的新生動物腹瀉的重組腺病毒載體疫苗免疫學評價方面尚未見報道。目的對表達產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌STAK99融合蛋白重組腺病毒載體ADSTAK99實驗室前期構建并命名進行擴增、純化，并對其進行免疫學評價研究。方法將重組腺病毒ADSTAK99侵染293細胞進行擴增，隨后經(jīng)CSCI密度梯度離心進行純化，分別通過肌肉注射、腹腔注射及灌胃免疫小鼠。同時，克隆ETEC腸毒素STA及粘附素K99融合基因STAK99，利用原核表達載體表達融合抗原蛋白STAK99。采用ELISA法分別檢測血清中特異性IGG、腸灌洗液中SIGA抗體、脾臟淋巴細胞增殖活性水平及CD4、CD8十T淋巴細胞分型比值；并通過動物攻毒保護試驗對其免疫效果進行評價。對攻毒后小鼠腸組織進行病理學切片觀察。結果1成功擴增、純化了重組腺病毒ADSTAK99，病毒滴度測定結果表明重組腺病毒感染效率較高，生物活性較好。2通過原核表達載體成功表達了融合抗原蛋白STAK99，SDSPAGE、WESTERNBLOT及ELISA鑒定結果與預期相符。3動物免疫實驗結果顯示免疫后小鼠特異性IGG、SLGA抗體及脾臟淋巴細胞增殖活性水平顯著升高，CD4／CD8值顯著增大。4動物攻毒保護實驗結果表明，通過腹腔注射、肌肉注射及灌胃免疫小鼠免疫保護率分別達到67％、70％及80％。5病理學切片觀察結果表明，ADSTAK99免疫小鼠腸組織與粘膜均完好，微絨毛形態(tài)完整，而對照組小鼠微絨毛脫落，腸粘膜嚴重損傷。結論1ADSTAK99可以通過肌肉注射、腹腔注射及灌胃方式免疫小鼠，刺激機體產(chǎn)生較高水平的體液免疫、細胞免疫和腸道局部粘膜免疫反應，有效保護小鼠機體免受產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌強毒株的侵害，安全性良好。2三種免疫途徑中，灌胃免疫效果最好，肌肉注射較好，腹腔注射效果一般。關鍵詞產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌，腺病毒載體，耐熱性腸毒素，黏附素

簡介：分類號S825Q7密級公開學號112310003農(nóng)學碩士學位論文慢病毒介導的RNAI沉默P21基因?qū)β谷赘杉毎飳W特性的影響學生姓名郭倩倩指導教師李春義研究員江蘇科技大學二〇一四年六月江蘇科技大學理學碩士學位論文江蘇科技大學學位論文原創(chuàng)性聲明江蘇科技大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名年月日