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簡介：山東大學碩士學位論文慢性進行性眼外肌麻痹及KEARNSSAYRE綜合征患者線粒體DNA突變的研究姓名孫明申請學位級別碩士專業(yè)眼科學指導教師張林娜20060521山東大學碩士學位論文慢性進行性眼外肌麻痹及KEARNSSAYRE綜合征患者線粒體DNA突變的研究研究生孫明導師張林娜教授中文摘要目的近年來，入們在線粒體呼吸鏈缺乏而引起的疾病，特別是CPEO的患者的肌肉組織和其他多種組織中發(fā)現(xiàn)有大片段的線粒體DNA缺失。許多研究表明這些缺失是這類疾病的重要病因。本實驗將檢測11例慢性進行性眼外肌麻痹及KEARNSSAYRE綜合征患者骨骼肌細胞的線粒體DNA的缺失情況。方法從11例慢性進行性眼外肌麻痹和KEARNSSAYRE綜合征患者的骨骼肌活檢標本中，提取總體DNA。根據(jù)限制性內切酶PVULI使用說明，取1PGDNA，加入2個單位的酶，37℃下，在終體積為20|IL的反應體系中消化1小時酶切位點在2654，使DNA線性化。將DNA片段加入濃度為08％的瓊脂糖凝膠中，與HINDⅢDIGESTMARKER同時電泳，至MARKER移至膠的中部停止電泳，使DNA片段按大小分離。將瓊脂糖凝膠在02MHCI中浸泡8MIN使DNA脫嘌呤，然后浸入變性液中浸泡2X15RAIN使DNA變性，再浸入中和液中浸泡215MIN使之中和。使用20XSSC轉移液，采用毛細轉移法將凝膠上的DNA轉移至正電荷尼龍膜上。使用線粒體／胞質病毒DNA純化試劑盒從正常人全血中提取全長線粒體DNA作為探針，使用地高辛高效標記與檢測試劑盒進行地高辛一DUTP標記，并與正電荷尼龍膜進行預雜交，雜交、雜交后沖洗及顯色反應。結果正常對照的標本只出現(xiàn)一條165KB的雜交帶。11例CPEO及KSS患者在165KB處也均有一條雜交帶。有7例患者除一條正常大小雜交帶外，還有一條異常的缺失型線粒體DNA雜交帶。出現(xiàn)缺失型線粒體DNA的患者占總數(shù)的64％。劑量分析表明缺失型線粒體DNA占總線粒體DNA的50～75％。缺失片斷大小在45～55KB之間。

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簡介：本文主要從以下幾個部分展開論述第一部分包裹骨髓間充質干細胞的殼聚糖Β甘油磷酸鈉水凝膠的制作及相關研究目的研究溫敏型殼聚糖Β甘油磷酸鈉CHITOSANΒGLYCEROLPHOSPHATECGP水凝膠的制作以及作為細胞載體對其中的兔骨髓間充質干細胞BONEMARROWMESENCHYMESTEMCELLSBMSCS粘附、生長、和增殖的影響。方法將殼聚糖CHITOSANCS與Β甘油磷酸鈉ΒGLYCEROLPHOSPHATEGP按照31的比例混合后放置于37℃溫度條件下可形成固態(tài)水凝膠。將體外培養(yǎng)、擴增的兔BMSCS與CGP溶液混合、固化形成水凝膠后制作冰凍切片行蘇木素伊紅HE染色觀察其粘附和生長情況通過CCK8法和死活細胞熒光染色法檢測BMSCS在CGP水凝膠中的生長、增殖情況。結果BMSCSCGP混合溶液置于37℃培養(yǎng)箱內L0MINS可固化形成水凝膠。BMSCS與CGP溶液混合培養(yǎng)14天后細胞增值數(shù)量多其形態(tài)為長梭形伸展良好。冰凍切片HE染色顯示CGP水凝膠呈現(xiàn)均質紅染有孔隙樣結構BMSCS分布較均勻形態(tài)大部分為圓形胞核藍染呈圓形或橢圓形。CCK8法測定實驗組光吸收值與對照組比較除第2天有顯著性差異P005。死活細胞熒光染色顯示培養(yǎng)14天后實驗組中BMSCS絕大多數(shù)被染成綠色極少量死細胞被染成紅色。細胞形態(tài)為多邊形伸展良好?；罴毎嚷屎突罴毎芏扰c對照組比較均無顯著性差異P005。結論CGP溫敏型水凝膠在接近于人體內體溫的條件下可長期保持水凝膠狀態(tài)CGP溫敏型水凝膠對BMSCS無細胞毒性且適合細胞粘附和生長為進一步試驗奠定了基礎。第二部分新型磷酸鈣骨水泥材料的制作及其細胞毒性、機械性能、孔隙結構的相關研究目的探討新型大孔隙磷酸鈣骨水泥CALCIUMPHOSPHATECEMENTCPC材料支架的細胞毒性和對細胞粘附、生長和增殖的影響。方法新型CPC在固相的混合過程中首先將細化后的磷酸四鈣TETRACALCIUMPHOSPHATETTCP和磷酸氫鈣DICALCIUMPHOSPHATEANHYDROUSDCPA粉末按11摩爾比的比例配制成CPC固體粉末再將質量比為50％的水溶性甘露醇晶體加入到CPC固體粉末中用來制造大孔隙。應用磷酸鹽緩沖液為固化液。將CPC固體粉末與固化液按照2G1ML的比例在研缽中混合均勻得到糊狀混合物即CPC面團。通過CCK8法檢測細胞在新型CPC材料浸提液中的生長增殖情況通過電子掃描電鏡測試材料孔徑應用力學三點彎曲實驗測試新型CPC的生物力學性能。結果通過掃描電鏡觀察和測量新型CPC材料的孔徑值達到26743±11801ΜM而傳統(tǒng)CPC材料的孔徑值只有666±258ΜM兩者比較具有顯著性差異P005。新型CPC材料細胞毒性評級為1級即該材料對BMSCS無明顯毒性。結論新型CPC材料具有強大的生物力學性能、大孔隙、高孔隙率和良好的生物相容性有望成為理想的骨組織工程支架。第三部分新型磷酸鈣骨水泥混合材料包含包裹骨髓間充質干細胞的殼聚糖水凝膠和甘露醇晶體中細胞活性和成骨分化的相關研究目的研究溫敏型CGP水凝膠對包裹其中的BMSCS在CPC自凝固化過程中的保護作用以及BMSCS在新型CPC混合材料包含包裹骨髓間充質干細胞的殼聚糖水凝膠和甘露醇晶體中的粘附、增殖和成骨分化情況。方法將體外培養(yǎng)、擴增的兔BMSCS與CGP溶液混合置于培養(yǎng)板底層放置37℃條件下固化形成水凝膠將CPC面團置于培養(yǎng)板中水凝膠層的上方放置37℃條件下固化。通過CCK8法和死活細胞熒光染色法檢測包裹于CGP水凝膠中的BMSCS通過CPC自凝固化過程后的細胞生存及增殖活性通過組織化學方法檢測堿性磷酸酶ALKALINEPHOSPHATASEALP活性茜素紅染色檢測鈣化結節(jié)的表達RTPCR檢測ALP和降鈣素CALCITONINCTMRNA的表達。通過電子掃描電鏡觀察BMSCS在新型CPC材料中的生長及粘附情況。結果包裹于CGP水凝膠中的BMSCS在CPC材料中培養(yǎng)14天后的死活細胞熒光染色顯示活細胞比率為7877±266％同單純BMSCS細胞懸液組8207±430％和CGP水凝膠組8003±308％比較無顯著性差異P005活細胞密度為8254±417％同單純BMSCS細胞懸液組8637±481％和CGP水凝膠組8363±520％比較亦無顯著性差異P005。包裹于CGP水凝膠中的BMSCS在CPC材料中使用成骨培養(yǎng)基培養(yǎng)7天和14天后ALP、茜素紅染色均為陽性同對照組無差異P005RTPCR結果亦顯示ALP和CT的MRNA基因表達明顯增強。BMSCS在新型CPC復合支架材料上培養(yǎng)5天掃描電子顯微鏡顯示BMSCS向CPC材料的孔隙深部長入并且緊緊地附著在類似納米羥基磷灰石骨礦物質材料上。結論溫敏型CGP水凝膠對包裹其中的BMSCS在CPC自凝固化過程中可起到保護作用新型CPC復合支架材料無細胞毒性其三維孔隙結構及材料特性適合BMSCS粘附、生長、增殖和成骨分化。第四部分兔橈骨缺損模型制作及新型磷酸鈣骨水泥材料對骨折缺損模型的治療效果目的研究兔橈骨缺損模型的制作以及觀察新型CPC材料對兔橈骨缺損模型的修復治療效果。方法選用12只成年健康的新西蘭大白兔沿其雙側前臂橈側暴露橈骨中段截取約1CM骨干制造骨缺損模型。其中6只為試驗組植入新型CPC另6只為對照組植入傳統(tǒng)CPC。分別于手術當天、術后第4周、8周和第12周行雙上肢X線片檢查于術后第12周行雙上肢MRI檢查、組織切片HE染色觀察和生物力學測定。結果新型CPC材料植入兔橈骨缺損處后未出現(xiàn)炎性、排斥等不良反應。術后第4周、8周和12周X線片檢查顯示試驗組骨折缺損修復情況明顯優(yōu)于對照組。實驗組術后12周螺旋CT三維重建可見橈骨缺損區(qū)域與周圍正常骨質整合完整骨組織爬行替代理想骨折缺損間隙模糊消失。對照組橈骨缺損區(qū)域植入的傳統(tǒng)CPC材料降解吸收骨折缺損依舊存在與周圍正常骨質無明顯連接整合。術后第12周通過組織形態(tài)學觀察實驗組成骨及塑形等方面明顯優(yōu)于對照組。兔橈骨三點彎曲試驗結果顯示術后第12周實驗組的最大負荷FMAX、抗彎曲強度FLEXURALSTRENGTH和載荷位移FD與對照組比較均具有統(tǒng)計學差異P005結論新型CPC材料具有良好的生物相容性、降解性和細胞活性對兔橈骨缺損模型的修復具有良好的治療效果對于作為理想的骨組織工程支架具有光明的前景。

簡介：目的本實驗通過建立大鼠脛骨洞形骨缺損的動物模型，觀察NGFBIOOSS骨粉混合物是否具有促進成骨的作用。方法48只雄性SD大鼠，平均體重220250G，采用完全隨機法分成3組，每組16只。在左側脛骨結節(jié)下1CM處制備約3MM長深達髓腔的骨塊缺損模型，實驗組骨缺損植入NGFBIOOSS骨粉混合物，對照組骨缺損植入生理鹽水BIOOSS骨粉，空白組為單純脛骨骨缺損，未做任何處理。每組分別于術后4周和8周各處死動物8只。通過大體解剖標本、X線片、組織形態(tài)學及BMP2免疫組組織化學染色等方法，觀察各組各時期新骨生成的情況。結果1術后4周大體解剖觀察實驗組骨缺損愈合較早，新骨的形成明顯比對照組和空白組快；組織學觀察結果實驗組新生骨小梁、成骨細胞、新生血管均多于對照組和空白組；BMP2免疫組化染色結果染色陽性主要表達在骨膜下和骨小梁周圍，陽性細胞主要是一些成骨細胞和未成熟的骨細胞。實驗組陽性細胞的平均光密度值明顯高于對照組，差別有統(tǒng)計學意義P＜001，空白組陽性細胞的平均光密度值最低，與其他組相比，差別有統(tǒng)計學意義P＜001。2術后8周大體解剖觀察各組骨缺損基本愈合，其中實驗組生成的新骨與周圍骨組織一致；X線片觀察結果實驗組和對照組骨缺損區(qū)影像的密度接近周圍骨組織，輪廓與原骨缺損區(qū)一致，空白組骨缺損區(qū)影像密度稍低，有骨缺損切跡；組織學觀察結果各組的骨缺損區(qū)均為新生骨充填，空白組骨缺損區(qū)中央的骨質成熟度最低。結論NGFBIOOSS骨粉混合物能明顯促進大鼠脛骨洞形骨缺損早期新骨的形成及骨量的增加，促進骨質的成熟，縮短愈合時間。

簡介：蘇州大學碩士學位論文長期重復應用A型肉毒毒素治療面肌痙攣的療效及對面神經CMAP的影響姓名韓旺申請學位級別碩士專業(yè)神經病學指導教師羅蔚鋒20070401長期重復應用A型肉毒毒素治療面肌痙攣的療效及對面神經CMAP的影響中文摘要周、2周、1月、3月、6月時的CMAP潛伏期及波幅的變化，以明確A型肉毒毒素對面神經的阻滯作用及隨時間恢復的情況。3．長期未治組及長期重復治療組治療6個月后CMAP潛伏期、波幅自身患健側、組間患側比較，以了解長期重復注射A型肉毒毒素對面神經CMAP的影響。結果1．早期組、長期未治組的CMAP潛伏期、波幅分自身比較及組間患側比較均無顯著性差異．2．7例早期組HFS患者A型肉毒毒素注射后其面神經CMAP潛伏期較治療前明顯延長、波幅顯著降低。兩者均隨時間緩慢恢復，CMAP潛伏期大約注射后3個月恢復至正常水平，波幅則需6個月。3．長期重復治療組患側C姒P潛伏期與自身健側、長期未治組患側比均無明顯差異，長期重復治療組患側CMAP波幅與自身健側、長期未治組患側比均有顯著性差異。結論1．未發(fā)現(xiàn)HFS對面神經CMAP有影響，既使長期患病亦如此。2．A型肉毒毒素注射后對面神經的阻滯作用明顯，表現(xiàn)為CMAP潛伏期的延長及波幅的顯著降低。兩者均隨時間緩慢恢復其中潛伏期于注射后3個月恢復至正常水平，而波幅則需6個月或更長。3．長期重復注射A型肉毒毒素后面神經CMAP潛伏期仍能如期恢復正常，而波幅的恢復更加緩慢持久．關鍵詞面脅痊攣；A型肉毒毒素；復合肌肉動作電位Ⅱ作者韓旺指導老師羅蔚鋒

簡介：目的探索PTHRP、NOTCH雙信號通路對骨骺干細胞增殖的調控規(guī)律及二者之間的相互作用。方法體內實驗取24H內新生大鼠股骨體外器官培養(yǎng)，分別用PTHRP信號通路激活劑PTHRP134和PTHRP受體競爭抑制物PTHRP734，NOTCH信號通路激活劑JAGGED1FC和抑制劑DAPT處理，空白對照加PBS緩沖液，培養(yǎng)72H后收集標本行HE染色比較骨骺干細胞層在骨骺全長中比值和BRDU染色檢測細胞增殖情況，并用免疫組化染色方法檢測當PTHRP信號通路被干預時NOTCH信號通路配體JAGGED1、受體NICD蛋白的表達情況，及當NOTCH信號通路被干預時PTHRP蛋白的表達情況。體外實驗采用機械分離和酶消化法分離培養(yǎng)骨骺干細胞，與PTHRP134、PTHRP734共培養(yǎng)后，用WESTERN印跡檢測JAGGED1、NICD蛋白的表達，同時進一步通過構建PTHRP、NICD過表達和RNAI慢病毒轉染體外培養(yǎng)的骨骺干細胞，在用WESTERN印跡檢測相應基因轉染成功的前提下，檢測當PTHRP信號通路被干預時JAGGED1、NICD蛋白的表達情況，及當NOTCH信號通路被干預時PTHRP蛋白的表達情況。結果在體外器官培養(yǎng)24H內新生大鼠股骨實驗中，與對照組相比，PTHRP134、JAGGED1FC處理組靜止區(qū)骨骺干細胞層長度在骨骺全長中比值明顯增高，BRDU陽性細胞率也增高P＜001，促細胞增殖作用明顯；而PTHRP734、DAPT處理組靜止區(qū)骨骺干細胞層長度在骨骺全長中比值明顯降低，BRDU陽性細胞率也降低P＜005，抑制骨骺干細胞增殖。在體內外實驗中均發(fā)現(xiàn)當PTHRP信號通路被激活時，JAGGED1、NICD蛋白的表達增高，當PTHRP信號通路被抑制時，JAGGED1、NICD蛋白的表達則降低；而當NOTCH信號通路被激活時，PTHRP蛋白的表達降低，當NOTCH信號通路被抑制時，PTHRP蛋白的表達增高。結論從細胞水平、器官水平分別證實PTHRP、NOTCH信號通路均可促進骨骺干細胞增殖，PTHRP信號通路對NOTCH信號通路存在正調控，NOTCH信號通路對PTHRP信號通路存在負調控，二者構成一個負反饋環(huán)從而對大鼠骨骺干細胞的增殖發(fā)揮調節(jié)作用。

簡介：目的本課題利用中空多孔金屬支架為骨組織再生工程構架，觀察體外骨髓基質干細胞BONENARROWMOSONCHYMALSTEMCELLS，BMSC在支架內、外的分化生長情況以及成骨的可能性，并探討體外應用骨誘導因子骨形態(tài)發(fā)生蛋白2RECOMBINEDHUMANBONOMPHOGEICPROTEIN2，RHBMP2提高成骨活性，促進金屬假體與骨質相對一體化結合的可行性，為研制中空多孔人工關節(jié)假體或其他骨組織再生骨植入物提供基礎實驗依據(jù)希望實驗結果能夠為生物固定的人工關節(jié)設計方法的改進提供一些理論及實驗依據(jù)。方法自行設計中空金屬試件，采用中空金屬試件A組、中空金屬試件假體脫鈣骨基質DETALCIFIEDBONEMATRIXDBMB組、中空金屬試件DBM成骨誘導液C組、中空金屬假體DBMRHBMP2培養(yǎng)液D組，金屬試件均為HA涂層，于BMSC混懸液中加10％胎牛血清DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，在2、4周觀察點取材，通過倒置相差顯微鏡、掃描電鏡、成骨細胞表型檢測等方法對中空金屬試件表面、脫鈣骨基質BMSC生長以及成骨分化進行觀察、鑒定。使用SPSS150軟件包進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準差表示，組問同一時間各指標比較采用組問方差分析。結果實驗發(fā)現(xiàn)倒置相差顯微鏡、掃描電鏡等方法顯示中空金屬試件表面及試件內三維細胞支架上BMSC細胞黏附正常，經成骨誘導后轉為成骨細胞，并形成工程化組織。在實驗設計的兩種骨誘導方式中，成骨細胞的表達以成骨誘導液為明顯，在統(tǒng)計學意義上其他對照組有明顯差異。結論一、體外BMSC經誘導向成骨細胞分化，并可在中空金屬試件的空間結構中形成組織塊。二、中空金屬假體的設計思路是可行的，在體外可以觀察到BMSC在金屬腔壁與腔內細胞支架之間緊密結合，并且在無細胞支架的情況下，1MM孔洞可以形成細胞間的直接連接。因此中空結構的假體是一個值得探索的方向，希望對生物復合型假體的改進具有一定的指導意義。

簡介：目的觀察化瘀止痛膠囊配合敷臍止痛散綜合治療子宮腺肌病的臨床療效并探討其作用機理。方法臨床選取65例子宮腺肌病患者其中治療組35例經前及經期外用敷臍止痛散經期服用化瘀止痛膠囊對照組30例經前及經期外用花季神闕貼經期服用散結鎮(zhèn)痛膠囊。觀察兩組患者痛經、月經及臨床癥狀的改善子宮體積大小、血清CA125、PGE2、腫瘤壞死因子ΑTNFΑ的變化。結果治療后治療組患者總療效、中醫(yī)證候療效、月經不調療效、中醫(yī)單項癥狀積分與對照組組間比較均有顯著性差異P005治療組優(yōu)于對照組。治療后兩組患者痛經積分及血清PGE2含量下降較療前均有顯著性差異P005組間比較無差異P005。治療組子宮體積、血清CA125、腫瘤壞死因子Α含量較療前降低有顯著性或非常顯著性差異P005治療后組間比較有顯著性差異或者非常顯著性差異P結論化瘀止痛膠囊配合敷臍止痛散綜合治療子宮腺肌病療效較好既可緩解痛經癥狀又可調理月經的紊亂其改善月經方面的作用與對照組比較尤為顯著其治療作用可能是通過抑制異位內膜的侵襲力抑制子宮內膜及肌層內新生血管的生長從而減少內膜的增生種植、縮小異位病灶進而縮小子宮體積減少月經量有關。

簡介：目的觀察不同濃度的醫(yī)用臭氧與玻璃酸鈉膝關節(jié)腔內注射治療老年人單側膝骨性關節(jié)炎的臨床治療效果。方法2009年8月至2010年6月在武漢市協(xié)和醫(yī)院及湖北省中山醫(yī)院門診選擇符合標準的單側膝骨性關節(jié)炎患者共114例，隨機分為四組隨機分為四組即A、B、C、D組。A組臭氧治療組26例臭氧濃度為40UGML；B組臭氧治療組28例臭氧濃度為30UGML；C組臭氧治療組28例臭氧濃度為20UGML，均抽取20ML臭氧注入關節(jié)腔內，每周兩次為一個療程。D組32例采用關節(jié)腔內注射玻璃酸鈉（25ML25MG）注射液，每周一次，5次為一個療程。采用VAS評分、JOA療效評分、WOMAC骨關節(jié)炎指數(shù)評分以及BBS評分量表來評定兩組用藥前，后1周、1月、3月、6月的改變情況及副作用，并做統(tǒng)計學分析。結果治療前T0四組患者VASJOA療效，WOMAC關節(jié)炎指數(shù)及BBS平衡量表評分差異無統(tǒng)計學意義（P005）。治療后四組各時間段VAS評分、JOA療效評分、WOMAC骨關節(jié)炎指數(shù)及BBS平衡量表評分均好于治療前，差異有統(tǒng)計學意義（P結論不同濃度的醫(yī)用臭氧及玻璃酸鈉組均能減輕患者疼痛，改善膝關節(jié)功能提高生活質量，對預防跌倒有一定的效果。濃度為30UGML臭氧三個月前臨床效果及副作用評價好于其它臭氧治療組及玻璃酸鈉組，六個月時膝關節(jié)腔內注射玻璃酸鈉療效好于臭氧治療組，但醫(yī)用臭氧組起效快，效果明顯，且安全性好，是值得推廣的治療膝骨性關節(jié)炎一種好方法。

簡介：環(huán)孢素A、胰島素對鏈脲佐菌素誘導的糖尿病大鼠骨轉換及其分子機制影響的研究我們近幾年在臨床上開展的腎活檢、皮膚活檢和肌肉活檢都證明，糖尿病人體內存在廣泛的多器官免疫損傷。多年來，糖尿病的防治都是以高血糖為中心的治療策略，因此糖尿病的慢性并發(fā)癥的發(fā)病機理和臨床處理都處于思想茫然和束手無策的尷尬境地。為弄清糖尿病發(fā)病機制，更好地從疾病的源頭預防和治療糖尿病及其并發(fā)癥，作者開展了糖尿病多器官的病理免疫學的研究并嘗試用環(huán)孢素A進行干預。本實驗是整個研究的一部分。第一部分環(huán)孢素A、胰島素對鏈脲佐菌素誘導的糖尿病DM大鼠骨轉換影響的研究目的1型DMT1DM是因胰島素絕對缺乏引起的以高血糖為特征的一組綜合征。其慢性并發(fā)癥包括長時間的慢性骨丟失。既往關于T1DM骨丟失的機制研究表明骨形成減低，而關于骨吸收變化研究結果不一，多數(shù)研究提示，骨吸收減低或無變化，但關于晚期糖基化終末產物AGES作用的研究表明，AGES主要是刺激骨吸收，故DM骨丟失的機制有待進一步研究。CSACSA是一種免疫抑制劑，可用于器官移植后的抗排斥反應和許多免疫性疾病，包括T1DM早期。隨著DM腎病腎移植患者增加，CSA的使用逐漸增多。因此，我們以鏈脲佐菌素STZ誘導的DM大鼠為模型，觀察其骨量和骨轉換的變化情況以及胰島素、CSA干預的影響，同時CSA對于正常大鼠骨量和骨轉換的影響。方法62只雄性SD大鼠，隨機分為正常對照組CON、正常低劑量CSA干預組NL、正常高劑量CSA干預組NH、單純DM組DM，DM低劑量CSA治療組DML，DM高劑量CSA治療組DMH，胰島素治療組INS。以靜脈注射STZ的方法制造DM大鼠模型，各低、高劑量CSA干預組按1MGKGD、8MGKGD皮下注射CSA，INS組按6UKGD給予中效胰島素皮下注射，成模8周后處死。留取血尿標本分別檢測胰島素、鈣、磷、堿性磷酸酶、骨鈣素和24小時尿鈣。留取左側脛骨近端23，行骨形態(tài)計量學分析。分離右側股骨和椎骨L15，行骨密度測量和骨生物力學試驗。結果各組大鼠血鈣、磷、堿性磷酸酶水平無顯著差異。STZ誘導的DM大鼠24小時尿量和尿鈣顯著增加，血清骨鈣素水平減低，股骨和腰椎骨密度較正常對照組顯著減低，骨計量形態(tài)學參數(shù)顯示骨小梁骨量顯著減低，動力學參數(shù)表明DM大鼠類骨質表面、骨表面激活頻率、組織水平的骨形成速率顯著減低，力學測試示骨力學性能減低。胰島素干預可使DM大鼠血糖水平下降，24小時尿量和尿鈣水平減低，血清骨鈣素水平增加，股骨和腰椎骨密度增加，骨力學性能改善，骨計量形態(tài)學參數(shù)顯示骨小梁骨量增加，但均未達正常對照組水平。動力學參數(shù)表明胰島素干預可使DM大鼠類骨質表面、骨表面激活頻率、組織水平的骨形成速率增加，可達到正常對照組水平。低劑量CSA干預正常大鼠結果骨密度，骨計量學指標、骨生物力學指標均與正常對照組無顯著差異。高劑量CSA干預正常大鼠，不影響大鼠血糖，骨密度、骨形態(tài)學參數(shù)、骨力學指標較正常對照組下降，同時血清骨鈣素水平、，骨動力學參數(shù)中的類骨質表面、標記表面、組織水平的骨形成速率較正常對照組增加。低劑量CSA干預DM大鼠，骨密度，骨計量學指標、骨生物力學指標均與DM組無顯著差異。高劑量干預DM大鼠，亦不影響大鼠血糖，可使DM大鼠骨密度和表示骨小梁骨量的形態(tài)學參數(shù)和骨力學性能均進一步減低，同時可使DM大鼠降低的血清骨鈣素水平增加，骨動力學參數(shù)也顯示可使DM大鼠降低的骨形成速率增加。結論STZ誘導的DM大鼠骨形成速度減低造成骨量減少，骨力學性能下降。胰島素治療可通過刺激骨形成，增加DM大鼠骨量，改善骨力學性能。低劑量CSA不影響正常大鼠和DM大鼠骨量、骨力學性能和骨轉換狀況。高劑量CSA干預正常大鼠可能誘發(fā)高轉換型骨量丟失和骨力學性能減低。高劑量CSA干預8周可使DM大鼠骨丟失進一步加重，并使DM大鼠低轉換型骨丟失向高轉換型骨丟失轉變。第二部分環(huán)孢素A、胰島素對鏈脲佐菌素誘導的糖尿病大鼠骨轉換分子機制影響的研究目的T1DM的一個重要的慢性并發(fā)癥就是慢性的骨丟失。TLDM導致骨丟失的作用機制主要是骨形成速度減慢，關于骨吸收的變化情況有待進一步明確。本研究擬通過檢測STZ誘導的DM大鼠和胰島素、CSA干預后的大鼠骨組織中標志破骨活性的核因子ΚB受體激活物配基RANKL護骨素OPGMRNA水平和標志成骨細胞分化晚期的骨鈣素OCMRNA水平，以及調控成骨細胞分化成熟的轉錄因子核結合因子1CBFAL、OSXMRNA的表達水平，分析DM大鼠骨丟失的分子機制和胰島素、CSA干預對其的影響。在增齡和廢用性骨質疏松時，骨組織中脂肪組織形成增加而成骨細胞生成或成熟減少導致骨丟失。既往有研究顯示，STZ誘導的DM小鼠外周組織脂肪含量減少，但骨髓中脂肪增加伴骨量減少。因而本研究擬通過計數(shù)大鼠骨髓脂肪細胞數(shù)量，同時檢測骨組織中標志脂肪細胞的過氧化物酶增殖激活物受體Γ2PPARΓ2MKNA表達水平，證實骨量減少是否與DM狀態(tài)下這種脂肪轉移機制有關，并分析胰島素和CSA干預分別對其有何影響。方法實驗動物和分組同上。分離右側脛骨近端13去除骨骺，提取骨組織總RNA，用實時熒光定量RTPCR的方法檢測大鼠骨組織中RANKL，OPG，OC，CBFAL，OSX和PPARΓ2MRNA的表達水平，分離左側股骨近端12，制做脫鈣骨切片，計數(shù)骨髓中脂肪細胞數(shù)量。結果STZ誘導的DM大鼠骨組織中標志骨吸收的RANKLOPGMRNA水平和標志成骨細胞分化成熟晚期的OC以及調控成骨的轉錄因子OSX、CBFALMRNA水平顯著減低，而標志脂肪細胞的PPARMRNA水平顯著增加，骨髓脂肪細胞計數(shù)增加伴皮下、肝臟脂肪減少。胰島素干預可使DM大鼠骨組織中OC、OSX、CBFALMRNA水平增加，而不影響骨組織中RANKLOPGMRNA水平，同時可使DM大鼠骨組織中標志脂肪細胞的PPARMRNA水平下降，骨髓脂肪細胞計數(shù)減少。CSA干預結果顯示，低劑量不影響正常大鼠和DM大鼠骨組織中所研究的各因子MRNA水平和骨髓脂肪細胞計數(shù)。高劑量8周可使正常大鼠和DM大鼠骨組織中RANKLOPGMRNA水平和OC、OSXMRNA水平均增加，但骨組織中CBFALMRNA水平無顯著變化，也不影響正常和DM大鼠骨組織中標志脂肪細胞的PPARMRNA水平和骨髓脂肪細胞計數(shù)。結論所研究的DM大鼠骨組織中骨吸收和骨形成的各標志因子MRNA水平均下降，考慮為低轉換型骨量丟失。同時，骨組織中標志脂肪細胞的PPARMRNA水平和骨髓脂肪細胞計數(shù)增加，而DM大鼠皮下、肝臟脂肪減少，提示這種脂肪轉移機制可能也存在于DM大鼠骨丟失過程中。胰島素干預可使DM大鼠骨組織中標志成骨活性的各因子MRNA水平增加，而對標志骨吸收的RANKLOPGMRNA水平無影響，提示胰島素主要通過刺激骨形成而非抑制骨吸收增加DM大鼠骨量。同時胰島素組骨組織中PPARMRNA和骨髓脂肪細胞計數(shù)減少，提示胰島素可能抑制骨髓多能間充質干細胞向脂肪細胞分化，促進其向成骨細胞分化，發(fā)揮促成骨作用。低劑量CSA不影響正常和DM大鼠骨轉換各因子和PPARΓ2MRNA和骨髓脂肪細胞計數(shù)。高劑量CSA可同時增加骨組織標志骨吸收和骨形成的各因子MRNA水平，但不影響骨組織中PPARMRNA和骨髓脂肪細胞計數(shù)，提示高劑量可能誘發(fā)正常和DM大鼠高轉換型骨量減少。

簡介：第一部分、骨髓間充質干細胞（BMSCS的成骨及成軟骨分化研究目的建立并完善入骨髓間充質干細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定方法，探討其體外成骨及成軟骨分化能力。方法1骨髓間充質干細胞BMSCS的培養(yǎng)自愿者知情同意，按標準骨髓穿刺程序，從髂后上棘處抽取骨髓510ML，肝素抗凝，加于FICOLL淋巴細胞分離液上，離心，以1X106個細胞接種于含基礎培養(yǎng)基LO％FBS低糖DMEM，100UML青霉素，100UML鏈霉素）的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。培養(yǎng)72H后首次換液，以后每隔3D換液。2骨髓間充質干細胞BMSCS的鑒定取培養(yǎng)至3代P3的細胞，抗體標記后，流式細胞儀檢測BMSCS表面抗原的表型CD44、CD73、CD90；3BMSCS的成骨分化誘導及鑒定取培養(yǎng)至第3代細胞，以3X105孔接種于6孔板中。實驗分為4組對照組、成骨誘導123周組。對照組用基礎培養(yǎng)基培養(yǎng)，成骨誘導組用成骨誘導培養(yǎng)基（含體積分數(shù)10?S低糖DMEM培養(yǎng)基，01ΜMOLL地塞米松50MGL抗壞血酸，10MMOLLΒ磷酸甘油鈉，100UML青霉素，100UML鏈霉素）分別培養(yǎng)123周。進行堿性磷酸酶活性測定、GIMO、茜素紅、VONKOSSA染色鑒定，并RTPCR檢測成骨細胞特異基因I型膠原、堿性磷酸酶ALP、骨鈣素OCN、骨唾液酸蛋白BSA、骨橋蛋白OPN及骨連接蛋白（ONN）基因的表達。4BMSCS的成軟骨分化誘導與鑒定取培養(yǎng)至第3代細胞，以3X105孔接種于6孔板中。實驗分為4組對照組、成軟骨誘導123周組。對照組用基礎培養(yǎng)基培養(yǎng)，成軟骨誘導組用成軟骨誘導培養(yǎng)基1MMOLL丙酮酸鈉01MMOLL抗壞血酸，01UMOLL地塞米松，1ITS，10NGLTGFΒ1）分別培養(yǎng)123周。進行阿爾新藍染色及Ⅱ型膠原免疫組化鑒定，并RTPCR檢測成軟骨細胞特異性基因COLLAGEⅡ、COLLAGEX、COMP及AGGRECAN的表達。結果1相差顯微鏡觀察原代BMSCS培養(yǎng)72H后換液，即可觀察到貼壁細胞，細胞形態(tài)短小，呈長梭形、紡錘形。培養(yǎng)至7D，細胞明顯增多、變長、變大，長梭形、紡錘形形態(tài)更加明顯。14D時，細胞基本鋪滿皿底，細胞排列呈螺旋狀或漩渦狀。傳代培養(yǎng)中，細胞基本保持長梭形的形態(tài)。2流式細胞儀FCM檢測發(fā)現(xiàn)BMSCS陽性表達間充質細胞表面標志CD44、CD73、CD90，陽性率均90以上。造血干細胞表面標志CD34、CD45表達陰性。3BMSCS成骨誘導鑒定成骨誘導后，GOMI、茜素紅、VONKOSSA染色均為陽性，BMSCS中ALP少量表達，成骨誘導3D、6D、2W、3W、4W時ALP活性顯著增強，并隨著誘導時間的增長，ALP活性亦隨之增加。RTPCR顯示誘導的BMSCS有COLLAGENI、ALP、OCN、BSP、OPN、ONN基因的表達。4BMSCS成軟骨誘導鑒定成軟骨誘導后，阿爾新藍染色陽性，BMSCS誘導四周后的微球免疫組化顯示有Ⅱ型膠原的表達。RTPCR顯示誘導的BMSCS有成軟骨細胞特異性基因COLLAGEⅡ、COLLAGEX、COMP及AGGRECAN的表達。結論1建立了一整套穩(wěn)定、成熟的骨髓間充質干細胞分離、培養(yǎng)、擴增方案，骨髓間充質干細胞陽性率高，傳代不喪失遺傳穩(wěn)定性，為以后的BMSCS臨床應用提供了可靠的參考依據(jù)。2BMSCS具有很好的成骨及成軟骨分化特性，可用于自體移植，無免疫排斥反應，可成為組織工程較為理想的種子細胞。第二部分、CIN在骨代謝過程中的表達及其生物學機制研究CIN是心臟中發(fā)現(xiàn)的一種Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶，可將心鈉素前體PROATRIALNATRIURETICPEPTIDE，PROANP轉化成有活性的ANP，從而調節(jié)血壓和心臟功能。最近有研究報道，CIN在發(fā)育著的骨組織中也有表達，骨代謝是骨形成（成骨細胞）和骨吸收破骨細胞）不斷重復進行的過程，骨質疏松癥是骨代謝疾病中最常見的形式，骨質疏松癥的形成主要是因為骨吸收超過了骨形成，進而引起骨量的減少。那么研究骨質疏松癥患者血清中可溶性CIN及骨代謝過程中CIN的表達，有助于進一步了解CIN的結構和功能以及參與骨代謝過程的生理病理意義。目的體外模擬體內骨形成的過程，探討CIN在骨形成過程中的表達情況，檢測骨質疏松病人血清中可溶性CIN水平，探討CIN的表達與骨質疏松的關系及其臨床意義，進而探討CIN在骨代謝過程成骨發(fā)生及破骨吸收）中的表達及其生物學作用。方法1骨髓間充質干細胞BMSCS的培養(yǎng)及成骨及成軟骨分化，及分化過程中MRNA的提取。2利用反轉錄PCRRTPCR技術對BMSCS成骨細胞、成軟骨細胞CINMRNA的表達進行分析；3實時定量PCRQRTPCR檢測BMSCS、成骨誘導123周）、成軟骨誘導123周）CINMRNA的表達；4采集正常人、單純骨折病人、骨量減少及骨質疏松癥病人的外周血于2小時內3，000G離心10MIN，取上層血清，分裝保存。5應用酶聯(lián)免疫吸附法ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAYELISA檢測125例正常人、102例單純骨折病人、53例骨量減少病人、101例骨質疏松癥病人血清標本的可溶性CIN。結果1CINMRNA在BMSCS、成骨細胞及成軟骨細胞中均有表達。2隨著BMSCS成骨及成軟骨誘導時間的逐漸增加，CINMRNA的表達量也呈逐漸增加的趨勢。3骨量減少與骨質疏松癥病人血清中的CIN水平明顯低于正常對照組與單純骨折組（510±228478±183PGMLVS695±248PGML706±345PGML，P＜O001），而骨量減少與骨質疏松癥病人組相比、正常對照組與單純骨折組相比均無統(tǒng)計學意義P＞005；4在骨質疏松癥病人組，無論男性與女性患者血清CIN水平均顯著低于正常男性與女性男性組894±257VS643±198PGML，P＜005女性組595±172VS438±155PGMLP＜O001；5在骨量減少與骨質疏松癥組，我們發(fā)現(xiàn)血清CIN值與病人骨密度值存在線性相關關系P003）。6多元線性回歸分析結果提示病人病史高血壓病，P＜005）是一個相關因素。另外，性別也是血清CIN水平的獨立相關因素P＜0001。結論1CIN在BMSCS、成骨細胞及成軟骨細胞中均有表達，且在骨及軟骨形成的過程中CIN的表達是上調的。2與正常人比較，骨質疏松癥病人血清中的可溶性CIN蛋白表達水平顯著降低。3在骨量減少與骨質疏松癥病人中，血清中的CIN水平與骨密度呈線性相關。且血清中CIN水平隨疾病嚴重程度而進行性下降趨勢。提示，血清中可溶性CIN水平可能為骨質疏松癥的診斷及評估病情提供新的依據(jù)。

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簡介：背景和目的誘發(fā)電位EVOKEDPOTENTIAL，EP是指對神經系統(tǒng)的某一特定部位給予適宜刺激，在神經系統(tǒng)相應部位檢出的與刺激有鎖定關系的電位變化。誘發(fā)電位是檢測神經通路結構與功能完整性的電生理學檢查方法，它具有客觀性、敏感性和良好的重復性。運動誘發(fā)電位MOTEVOKEDPOTENTIAL，MEP是刺激皮層運動區(qū)或運動傳出通路，在刺激點下方的傳出徑路及效應器一肌肉所記錄到的電反應，能直接反映錐體系的功能狀態(tài)，用于評價運動神經系統(tǒng)功能的完整性。丙泊酚是目前臨床上最常用的靜脈麻醉藥之一，具有起效快、維持時間短、蘇醒迅速而完全的特點。芬太尼是臨床上應用最廣泛的阿片類鎮(zhèn)痛藥，常與丙泊酚聯(lián)合應用于麻醉的誘導和維持。近年來，麻醉藥物對MEP的影響作用已逐漸成為新的研究領域，越來越受到臨床醫(yī)生的關注。文獻報道丙泊酚單次靜脈注射對骨骼肌的MEP有一過性的抑制作用，丙泊酚持續(xù)靜脈輸注對骨骼肌MEP可產生劑量依賴性的抑制作用，表現(xiàn)為MEP波幅下降，潛伏期延長或不變。本研究將進一步比較同等劑量的丙泊酚單獨或聯(lián)合芬太尼單次靜脈注射對骨骼肌MEP的影響，旨在從藥理學的角度分析丙泊酚與芬太尼對骨骼肌MEP的影響作用，并探討其作用機制，為丙泊酚與芬太尼在臨床上的安全使用提供相關的理論依據(jù)。方法1病例選擇選擇ASAⅠ～Ⅱ級，心肺肝腎功能正常，無神經肌肉系統(tǒng)疾病，無中樞性作用藥物服藥史的普通外科擇期手術患者11例，術前不予麻醉前用藥。2研究設備1英國MAGSTIM200磁刺激器。2英國SYNERGYMULTIMEDIAEMGEP肌電誘發(fā)電位儀OXFDINSTRUINENTSMEDJCALINC。3日本光電8301多功能監(jiān)測儀。4韓國ROYALDELTA77麻醉機。3研究方法1患者入室后取平臥位。開放左側大隱靜脈，實驗前輸注復方乳酸林格氏液500ML，約7～10MLKGH。2用日本光電8301多功能監(jiān)測儀監(jiān)測左上臂平均動脈壓MAP、Ⅱ導聯(lián)心電圖ECGⅡ、心率HR和脈搏血氧飽和度SPO。實驗期間患者經面罩吸入100％氧氣，必要時行人工通氣，維持SPO99％以上和呼末二氧化碳分壓PCO在35～38MMHG范圍。手術室內溫度控制于26℃。3所有患者均取右手平置體側，前臂固定薄板上，拇指和其余四指分別外展固定。清潔皮膚后用心電圖電極貼帖在右拇短展肌表面，活動電極置于肌腹，參考電極置于遠側肌腱，極間阻抗棘突為磁刺激器MAGSTIM200，英國MAGSTIM公司刺激線圈的中點，將刺激線圈放在頸部，緊帖皮膚進行試驗刺激刺激強度取最大輸出強度的10％，沿脊柱正中線輕微地上下移動線圈，尋找能誘發(fā)出拇短展肌MEP最大波幅的刺激位置，作標記為磁刺激作用位點。5實驗人員在自身示范并講解磁刺激作用過程，指導患者放松上肢及全身肌肉，避免緊張對肌電反應產生干擾。記錄患者的MEP，待麻醉監(jiān)測、磁刺激器和MEP記錄儀工作條件穩(wěn)定后，逐級增大磁刺激的強度至磁刺激器的最大輸出強度20TESLA。收集6個最大刺激強度下的MEP，取均值為基礎值。6實驗一11例患者經大隱靜脈勻速注射丙泊酚2MGKG，注射時間為30秒。從注藥開始計時記錄拇短展肌的MEP，每20秒發(fā)出一次磁刺激，至患者恢復清醒出現(xiàn)睜眼或肢體動作時結束本次觀察。7實驗二實驗一注藥結束后30分鐘，11例患者再次經大隱靜脈依次勻速注射丙泊酚2MGKG和芬太尼5ΜGKG，注射時間為60秒每藥30秒。從注藥開始再次記錄患者的MEP，記錄周期為20秒，連續(xù)記錄18個MEP記錄時間為360秒后結束整個實驗。4監(jiān)測項目1MEPMEP的波幅值、MEF，的潛伏期。2呼吸循環(huán)系統(tǒng)MAP、HR、ECGⅡ和SPO。5統(tǒng)計學分析用SPSS115統(tǒng)計軟件SPSSSOFTWARECOLISA對狹得的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。計量資料用均數(shù)±標準差X±S表示，組間比較用配對T檢驗，所有計量資料均作正態(tài)分布試驗、方差齊性試驗，P005。5兩實驗注藥后MEP波幅下降到最低值的時程無統(tǒng)計學差異P0887。2血壓與心率的變化1兩實驗注藥前MAP的基礎值間無統(tǒng)計學差異P0113。注藥后實驗二MAP的最后值比實驗一MAP的最后值低P0007。2實驗一注藥后患者恢復清醒時MAP的最后值比注藥前MAP的基礎值低P0030實驗二注藥后至實驗停止時MAP的最后值也比注藥前MAP的基礎值低P0001。3兩實驗注藥前HR的基礎值無統(tǒng)計學差異P0709，注藥后實驗二HR的最后值比實驗一的最后值低P0001。4實驗一注藥后至患者恢復清醒時HR的最后值與注藥前的基礎值相比，兩者間無統(tǒng)計學差異P0715；實驗二注藥后至實驗結束時HR的最后值比注藥前的基礎值低P0005。結論1丙泊酚單次靜脈注射對頸部磁刺激誘發(fā)的拇短展肌MEP波幅有抑制作用。2丙泊酚聯(lián)合芬太尼單次靜脈注射，芬太尼可增強丙泊酚對頸部磁刺激誘發(fā)的拇短展肌MEP波幅的抑制作用。3丙泊酚聯(lián)合芬太尼單次靜脈注射，芬太尼未能影響丙泊酚對頸部磁刺激誘發(fā)的拇短展肌MEP波幅達到最大抑制的時程。4丙泊酚聯(lián)合芬太尼單次靜脈注射，芬太尼未能影響丙泊酚對頸部磁刺激誘發(fā)的拇短展肌MEP的潛伏期。

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簡介：目的對通過酶消化法獲取的兔尺骨皮質骨細胞進行鑒定探討其體外生長、增殖能力及理想的作為種子細胞的代數(shù)檢測兔皮質骨成骨細胞在自制小牛脫蛋白松質骨、凍干松質骨XKCFDB系列同種骨及可吸收性明膠海綿三種支架上的生長情況對三種支架材料與兔皮質骨成骨細胞的生物相容性進行評價并用不同的細胞密度與三種支架材料復合培養(yǎng)探求合適的細胞接種密度。為骨組織工程的細胞來源、載體材料的選擇和進一步動物體內試驗提供實驗依據(jù)。方法與結果第一章兔皮質骨來源成骨細胞體外培養(yǎng)與鑒定的實驗研究從3月齡新西蘭大白兔雌雄不限獲取尺骨皮質骨通過酶消化法獲取原代細胞適時傳代。每日倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)及增殖特征MTT法檢測細胞生長和增殖情況繪制生長曲線檢測第2、3、6、7和8代細胞ALP行ALP染色、I型膠原免疫組織化學染色及骨鈣素免疫組化染色對細胞進行鑒定。結果分離培養(yǎng)出的原代細胞形態(tài)類似成纖維細胞具有良好的體外增殖能力細胞倍增時間約為7天各項染色檢測呈強陽性。細胞增殖速度第1～2天各代細胞無差別P＞005第3天開始第7、8代細胞落后于第2、3和6代細胞一直持續(xù)到第10天P＜005而第2、3代同第6代細胞及第7代同第8代細胞之間無顯著性差異P＞005。ALP檢測第2、3、6代成骨細胞高于第7、8代細胞P＜005。第二章兔皮質骨來源成骨細胞與三種支架材料的復合培養(yǎng)將成骨細胞接種到三種支架材料上進行體外復合培養(yǎng)用倒置相差顯微鏡、掃描電鏡觀察細胞在支架材料上的生長、增殖情況并進行MTT、細胞上架率、ALP及骨鈣素檢測。結果倒置相差顯微鏡顯示三種支架為多孔網狀孔隙互相通連隨培養(yǎng)時間的延長細胞生長旺盛增殖迅速。掃描電鏡顯示復合培養(yǎng)3D時有較多的細胞粘附并鋪展在支架上培養(yǎng)6D時細胞完全伸展呈長梭形10D時細胞分泌較多的細胞外基質重疊生長并連接成網狀尤以兩種骨性材料組明顯。MTT檢測顯示三種支架材料在實驗前期不影響成骨細胞的生長、增殖P＞005后期9D、12D能促進成骨細胞的增殖及分泌與對照組比較有顯著性差異P＜005而三種支架材料組之間無顯著性差異P＞005。細胞上架率當細胞接種密度為1106ML時可吸收明膠海綿細胞上架率最高為4552±315％。ALP檢測細胞密度為1105ML時各組之間無顯著性差異P＞005細胞密度為1106ML時三種支架材料組高于對照組P＜005三種支架材料組之間無顯著性差異P＞005細胞密度為6106ML及1107ML時可吸收明膠海綿組＞小牛脫蛋白松質骨組＞凍干松質骨組＞對照組P＜005在12D時細胞密度為6106ML的各組支架材料ALP＞細胞密度為1107ML的各組支架材料ALP。骨鈣素檢測第14天小牛脫蛋白松質骨組及凍干松質骨組明顯高于對照組及可吸收明膠海綿組P＜005第21天及第28天小牛脫蛋白松質骨組＞凍干松質骨＞可吸收明膠海綿組＞對照組P＜005。結論1、兔尺骨皮質骨體外可以培養(yǎng)出成骨細胞體外培養(yǎng)的成骨細胞具有增殖、分泌功能其中第2、3、6代細胞增殖和分泌功能強于第7、8代細胞。新西蘭大白兔皮質骨成骨細胞理想的作為種子細胞的代數(shù)為26代細胞。2、三種支架材料與兔皮質骨成骨細胞理想細胞接種密度為1106M1～6106ML隨細胞接種密度上升細胞上架率在下降當細胞接種密度為1106ML時可吸收明膠海綿細胞上架率最高為4552±315％。3、在理想接種密度下ALP檢測可吸收明膠海綿＞小牛脫蛋白松質骨＞凍干松質骨＞對照組骨鈣素檢測小牛脫蛋白松質骨＞凍干松質骨＞可吸收明膠海綿＞對照組。4、本實驗制備的小牛脫蛋白松質骨與兔皮質骨成骨細胞具有良好的生物相容性及骨誘導性且制備方便價格低廉是很好的骨替代材料把小牛脫蛋白松質骨與兔皮質骨成骨細胞復合構建組織工程骨進行進一步試驗是可行的。