1、目的：本研究旨在通過全轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)（RNA sequencing,RNA-se q）在全基因表達(dá)譜范圍內(nèi)尋找所有和TB-IRIS（Tuberculosis-associated I mmuneReconstitution Inflammatory Syndrome，TB-IRIS）發(fā)生相關(guān)宿主因子或標(biāo)志物，探尋其預(yù)警指標(biāo)，協(xié)助疾病早期診斷，為有效降低TB-I RIS發(fā)病率和病死率、提高患者生活質(zhì)量提供幫助。
　　方法：納入4例單

2、純艾滋病（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）患者（H組），6例AIDS合并肺結(jié)核（Tuberculosis，TB）未發(fā)生IRIS患者（HT組），6例AIDS合并TB發(fā)生IRIS患者（HTI組），分別收集各組抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療前(Antiretroviral Therapy,ART）和ART2周時外周血，分離外周血單個核細(xì)胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell,

3、PBMC），構(gòu)建cDNA文庫，采用RNA-seq技術(shù)，分別檢測各組患者兩個時間點的全轉(zhuǎn)錄組表達(dá)水平，通過分析比較篩選出各組內(nèi)ART前后以及HTI組相對于HT組ART前后顯著差異表達(dá)基因（Differentially Expressed Genes,DEGs），然后應(yīng)用生物信息學(xué)方法進(jìn)行富集分析（TargetMine通路富集分析）進(jìn)一步篩選出具有生物學(xué)意義的DEGs及相關(guān)信號通路。應(yīng)用實時熒光定量PCR（q-PCR）對測序結(jié)果進(jìn)行驗證，最

4、終確定與TB-IRIS發(fā)生可能相關(guān)的預(yù)警基因。
　　結(jié)果：
　　(1) ART前HTI組CD4+T細(xì)胞水平顯著低于H及HT組(p=0.010)，HI V-RNA血漿病毒載量水平顯著高于H及HT組(p=0.023)。ART后HTI組CD4+T細(xì)胞數(shù)目一定程度恢復(fù)且HIV病毒載量顯著減少（平均減少到原來的1％），但HIV-RNA病毒載量水平仍顯著高于H及HT組。
　　(2) ART前HTI組與HT組共392個DEGs（19

5、7個上調(diào)，195個下調(diào)）（p<0.01，F(xiàn)DR<0.05），其中38個顯著富集于通用轉(zhuǎn)錄途徑（Generic T ranscription Pathway）（P=1.11e-6）。
　　(3)各組內(nèi)ART后相對ART前，HT組共有36個DEGs(28個上調(diào)，8個下調(diào))，HTI組共有74個DEGs（50個上調(diào)，24個下調(diào)），H組未發(fā)現(xiàn)DEGs。通路分析顯示HTI組74個DEGs顯著富集于干擾素α/β信號通路（p=1.35e-7）及細(xì)

6、胞因子相關(guān)通路。
　　(4) ART后HTI組相對于HT組共88個DEGs（81個上調(diào)，7個下調(diào)）。通路富集分析顯示這些基因顯著富集于細(xì)胞周期相關(guān)通路。
　　結(jié)論：
　?。?）ART前低CD4+T細(xì)胞數(shù)目和高HIV-RNA病毒載量可能與TB-IRIS的發(fā)生相關(guān)。
　?。?）TB-IRIS的發(fā)生可能與干擾素α/β信號通路、細(xì)胞因子相關(guān)通路、細(xì)胞周期通路有關(guān)。
　　（3）初步明確了TB-IRIS顯著差異基因表達(dá)