巨噬泡沫細胞源外泌體中microRNA調控血管平滑肌細胞增殖遷移機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、動脈粥樣硬化(Atherosclerosis, As)是心腦血管疾病發(fā)生的病理基礎,嚴重危害人類的健康。As發(fā)生過程中,巨噬泡沫細胞的形成發(fā)揮關鍵作用,血管平滑肌細胞(Vascular Smooth Muscle Cells, VSMCs)大量增殖、遷移,是此類疾病發(fā)生的重要病理基礎。外泌體(exosomes)是一類直徑大約為30~100 nm由活細胞分泌產生的膜性囊泡,其內攜帶多種物質,包括蛋白質、mRNA和miRNA等,exosom

2、es內攜帶的功能性分子可被其他細胞攝取,從而調控細胞的基因網絡,廣泛參與細胞間交流。microRNA(miRNA)是真核生物中發(fā)現的一類內源性具有調控功能的非編碼RNA,其大小約為23個核苷酸,進化上高度保守。通常與靶基因的3’非翻譯區(qū)(3’Untranslated Region,3’UTR)互補結合,在轉錄后水平降解或抑制靶標mRNA,實現對靶基因的表達調控。動脈粥樣硬化形成過程中,巨噬泡沫細胞形成和VSMCs大量增殖及遷移發(fā)揮重要作

3、用,我們探究巨噬泡沫細胞與 VSMCs之間能否通過exosomes進行交流,從而探究VSMCs增殖遷移新機制。
  本研究主要內容包括:⑴差速離心法分離exosomes后,透射電鏡觀察形態(tài),其直徑介于30~100 nm之間,呈圓形或杯狀囊泡形態(tài);檢測exosomes標記蛋白CD9,CD63,CD81均呈陽性表達;miRNA表達譜共篩選出188個與巨噬泡沫細胞相關的miRNAs(上調或下調大于2倍);與巨噬細胞源 exosomes相

4、比,巨噬泡沫細胞源 exosomes可明顯抑制VSMCs的增殖。⑵利用慢病毒載體感染人主動脈VSMCs,2μg/ml嘌呤霉素篩選后建立陰性對照(NC)、miR-483過表達組(LV-miR-483)和miR-483-3p抑制組(Anti-miR-483-3p)穩(wěn)轉VSMCs細胞系;與NC組VSMCs相比,LV-miR-483中miR-483-3p表達上調約48倍,說明我們成功構建穩(wěn)轉VSMCs細胞系。MTT法和EdU法分析細胞增殖能力,

5、與 NC組相比, LV-miR-483組 VSMCs增殖能力受到抑制, Anti-miR-483-3p組VSMCs增殖能力明顯增強;增殖細胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen, PCNA)蛋白水平呈現相同趨勢。細胞劃痕損傷法檢測過表達miR-483-3p可顯著抑制VSMCs的遷移,而Anti-miR-483-3p組VSMCs的遷移能力受到明顯抑制。表明miR-483-3p可抑制VSMCs增殖和遷

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