1、PICK1全稱為蛋白激酶Cα相互作用蛋白(Protein Interacting with CKinase)，普遍存在于人和動物的各種細胞和組織內，小鼠來源的PICK1蛋白由416個氨基酸殘基組成，主要由N端的PDZ結構域和C端的BAR結構域組成，還有兩個末端的酸性氨基酸區(qū)和連接區(qū)?，F已發(fā)現多種蛋白能與PICK1的PDZ結構域發(fā)生相互作用，在突觸可塑性、神經遞質傳遞、外周神經感覺、細胞生生長等方面發(fā)揮重要作用，并且與精神分裂癥、疼痛、帕

2、金森綜合癥、男性不育癥、抑郁以及癌癥等多種疾病的發(fā)生密切相關。因此，PICK1的PDZ結構域是一個潛在的藥物靶標，藥物分子物質可以通過與PICK1的PDZ結構域的特異性結合，干擾或阻斷PICK1與配體蛋白的天然相互作用，從而起到治療相關疾病的目的。
　　 我國的中草藥資源豐富，具有療效好，副作用少，適合長期服用及安全可靠等許多優(yōu)點，在防治和治療各種疾病中起到了重要作用。近年來，從中藥中提取有效成分在新藥和新藥先導化合物發(fā)現中發(fā)揮

3、著重要作用。本文圍繞PICK1的PDZ結構域開展以下工作。首先將含PICK1基因及PDZ編碼基因的重組質粒pET3 a-pick1和pET-3C-GB-pdz轉入E.coliBL21(DE3)中，經IPTG誘導，在大腸桿菌中獲得重組表達，目的蛋白經硫酸銨沉淀或Ni2+-NTA Sepharose4B column親和層析，再經Sephacryl S-200凝膠層析純化獲得電泳純的PICK1和GB-PDZ蛋白。進一步針對PICK1-PDZ

4、結構域中相關位點做如下定點突變，K27D28/AA，K83/A，I33G34I35/AAA并克隆至載體pETM-3C或pET-MG-3C中，并在E.coliBL21(DE3)中進行重組表達，表達產物經Ni2+-NTA Sepharose4B column親和層析和Sephacryl S-200凝膠層析獲得電泳純的重組PDZ突變體蛋白。
　　 其次利用熒光光譜法分析了3種中藥（款冬花，酸棗仁和茯苓）粗提物與PICK1及其不同結構域

5、的結合情況，結果表明3種中藥粗提物中的款冬花提取物與PICK1的結合最強，并且結合位點位于N端的PDZ結構域;通過系統溶劑萃取法將款冬花提取物分離為6種有機相提取物，熒光光譜法結果表明乙酸乙酯和正丁醇提取物與PICK1的PDZ結構域有明顯的相互作用;進一步確定款冬花中蘆丁與PICK1的PDZ結構域有明顯的相互作用。用PICK1 PDZ結構域的不同突變體蛋白與蘆丁進行熒光光譜分析，結果表明PICK1 PDZ結構域的不同突變體蛋白與蘆丁之間