高爾基體相關堆疊蛋白的PDZ結構域的初步晶體學結構研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、GRASP55和GRASP65是同一家族包含PDZ結構域(PDZ domain)的兩個高度同源的蛋白,GRASP55定位于高爾基中間膜囊而GRASP65則位于高爾基順面,這樣的定位可能說明這兩個蛋白在不同的扁平囊起堆疊作用。高爾基體是一類非常重要的細胞器,是蛋白質修飾、分選和水解、加工以及轉運分泌物質的場所。而其中高爾基體堆層的形成對高爾基體行使定位和酶功能起著至關重要的作用。在高爾基堆層形成中起作用的蛋白,一類就是介導有絲分裂后扁平囊

2、重生的蛋白如NSF、P115等;而另一類就是在形成堆疊層中起關鍵作用的GRASP55和GRASP65蛋白。NSF依賴的扁平囊重生主要靠giantin-P115-GM130栓鏈結構。而在高爾基堆層中關鍵的兩個蛋白GRASP55和GRASP65的堆疊作用機制至今未有報道,這個特殊性使其成為很好的研究對象。
   實驗中發(fā)現(xiàn)GRASP55&GRASP65的全長極易降解為N端的一小段,且GRASP55 N端的這一段性質要好于GRASP6

3、5。且經(jīng)過二級結構預測發(fā)現(xiàn)二者的N端都含有PDZ結構域,通常PDZ結構域使蛋白能夠相互作用,如果能夠得到這個功能域的結構,就能對了解堆疊作用的機制起到幫助。最終得到GRASP55N端的母體晶體數(shù)據(jù),但在硒代蛋白質晶體中因為硒的反常散射信號不強,導致數(shù)據(jù)不好,無法解析其結構。目前正在積極構建甲硫氨酸點突變,期望通過引入多個甲硫氨酸來增強信號,能夠得到較好的數(shù)據(jù),完成三維結構的分析。
   本研究選擇這兩個相似的同家族蛋白,通過蛋白

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