1、本課題組從我國(guó)25種胡椒屬植物中篩選出大葉藥(PiperlaetispicumC.DC.)作為目標(biāo)植物,展開(kāi)天然抗抑郁藥物的研究。大葉藥(P.laetispicumC.DC.)為胡椒科胡椒屬植物,主要分布于我國(guó)的廣東、廣西、云南和海南等省,民間異名小腸風(fēng)、山胡椒、野胡椒,主要用于活血、消腫、止痛[1]。通過(guò)對(duì)其藥理作用和有效成分的研究,確定該植物乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位的抗抑郁活性最強(qiáng),laetispicine為主要活性化合物。

2、r>　　 本文的選題以開(kāi)發(fā)中藥五類(lèi)新藥(天然藥物中提取的有效部位)為目標(biāo),按照該課題要求并參照國(guó)家藥品監(jiān)督局頒布的《新藥審批辦法》,從新藥的制備工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)兩方面進(jìn)行研究,以大葉藥提取物中的有效部位群“酰胺類(lèi)化合物”作為研究對(duì)象,建立了該類(lèi)化合物含量測(cè)定方法和最佳提取與純化方法,并為此進(jìn)行了有效部位化學(xué)成分的分離。為大葉藥抗抑郁新藥的開(kāi)發(fā)打下良好的基礎(chǔ)。
　　 在對(duì)大葉藥藥理活性和化學(xué)成分進(jìn)行研究時(shí),發(fā)現(xiàn)其乙醇提取物中存在大

3、量油性成分。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外對(duì)胡椒屬植物揮發(fā)油的殺蟲(chóng)、抗菌、抗氧化等活性也多有報(bào)道。
　　 本文包括以下5方面內(nèi)容:
　　 1.酰胺類(lèi)化合物對(duì)照品的制備
　　 經(jīng)過(guò)反復(fù)硅膠柱層析和制備HPLC法分離得到5種酰胺類(lèi)化合物。
　　 利用波譜技術(shù)(包括UV,IR,MS,1H-NMR,13C-NMR)鑒定結(jié)構(gòu),分別為N-isobutyl-(3',4'-methylenedioxyphenyl)-2E,4E-hept

4、adienamide、laetispiamideA、laetispiamideB、laetispicine和Dihydropipercide。
　　 2.總生物堿的含量測(cè)定方法
　　 首次建立了紫外分光光度法和半微量凱式定氮法兩種含量測(cè)定方法,測(cè)定大葉蒟抗抑郁有效部位總生物堿的含量,方法簡(jiǎn)便,可行。
　　 3.抗抑郁有效部位制備工藝研究
　　 首次將“星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法”引入大葉藥提取工藝研究,該方法簡(jiǎn)便

5、,試驗(yàn)次數(shù)較少。在模型建立上采用非線性數(shù)學(xué)模型擬合,復(fù)合相關(guān)系數(shù)較高,預(yù)測(cè)值更接近真實(shí)值(RSD=3.5％)。
　　 創(chuàng)建了大葉藥抗抑郁有效部位最佳提取與純化工藝,采用氮測(cè)定法測(cè)定酰胺類(lèi)化合物含量最高可達(dá)58％。
　　 提取工藝:考察乙醇濃度、提取時(shí)間及提取溶劑用量和提取次數(shù)各因素對(duì)總生物堿提取率的影響。以總生物堿含量為指標(biāo)對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,實(shí)驗(yàn)采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)一效應(yīng)面法,優(yōu)化工藝條件為70％乙醇為提取溶劑,乙醇用量為藥材

6、12倍(提取3次,每次回流30min)。
　　 純化工藝研究:篩選液一液萃取法分離有效部位總生物堿含量最高的最佳工藝條件。大葉藥浸膏用蒸餾水配制為濃度為100mg/mL的料液,3倍量石油醚脫脂后,乙酸乙酯:水=4:1萃取,減壓蒸干溶劑,得有效部位浸膏。
　　 4.5種酰胺類(lèi)化合物的含量測(cè)定
　　 首次建立了同時(shí)測(cè)定大葉藥中5個(gè)主要的酰胺類(lèi)單體指標(biāo)成分N-isobutyl-(3',4'-methylenedioxy

7、phenyl)-2E,4E-heptadienamide、laefispiamideA、laetispiamideB、laetispicine和Dihydropipercide含量的高效液相色譜分析方法,為制定大葉藥抗抑郁活性部位的指紋圖譜奠定了一定的基礎(chǔ)。
　　 該方法簡(jiǎn)便可行,為原料藥其質(zhì)量控制提供依據(jù)。色譜條件為甲醇:水(V/V)=77:23,流速1.5mL/min,259nm檢測(cè)。首次對(duì)大葉藥中5種指標(biāo)成分進(jìn)行了初步的定

8、性和定量的研究?？疾炝巳笕~蒟不同營(yíng)養(yǎng)器官中各化合物的含量。其中果實(shí)中l(wèi)aetispicine的含量最高,粗枝中l(wèi)aetispicine的含量也較高,根的laetispiamideA的含量最高,(分別約占原植物的1.1‰、0.2％0和1.6‰)。
　　 首次提出以laetispicine作為大葉藥特征性成分,從同科屬植物中鑒別大葉藥。對(duì)我國(guó)10種其它胡椒屬植物中各化合物的含量進(jìn)行測(cè)定,均未能檢出大葉藥抗抑郁活性成分laetis

9、piamideA、laetispiamideB和laetispicine,并且laetispicine周?chē)鷽](méi)有干擾成分。
　　 5.大葉蒟不同部位和黑胡椒揮發(fā)油化學(xué)成分的研究
　　 采用GC-MS首次分析了大葉藥根、莖、葉、果實(shí)和黑胡椒的揮發(fā)油化學(xué)成分,并將各揮發(fā)油的主要成分進(jìn)行了對(duì)比。共鑒定出化合物189個(gè)(根,64個(gè);莖,93個(gè);葉,87個(gè);果實(shí),58個(gè);黑胡椒,42個(gè)),鑒定率均在90％以上。
　　 通過(guò)將