1、低溫敏感性啟動子是一類特殊的啟動子，它們在低溫下的轉(zhuǎn)錄強度高于常溫下的。低溫下表達外源蛋白，可以增加蛋白的可溶性；一些熱敏感的蛋白非常適合低溫表達。自然界的低溫敏感性啟動子數(shù)量較少。為了研究這類啟動子的特點，以及構(gòu)建新型的低溫表達載體，本課題運用人工啟動子文庫（SPL）技術(shù)，篩選人工的低溫敏感性啟動子，并對這些啟動子進行研究。
　　 建立了適合低溫敏感性啟動子篩選的方法。通過對比研究抗性基因kan和綠色熒光蛋白基因EGFP各自做

2、報告基因時的優(yōu)缺點，確認采用EGFP基因為本課題中啟動子的報告基因。建立了簡便的雙層平板誘導(dǎo)法對啟動子進行初篩。
　　 通過分析對比大腸桿菌中四種冷激蛋白基因的啟動子序列，設(shè)計了隨機的人工啟動子序列，運用反向PCR技術(shù)建立了包含1500個以上轉(zhuǎn)化子的人工啟動子文庫。初篩后獲得106個有效啟動子；復(fù)篩后得到17個低溫敏感性啟動子；測序后確認了7個不同的低溫敏感性啟動子。
　　 選擇溫度敏感性較好的強啟動子P129和弱啟動子

3、P3分別進行了特征測定。分析過程中以天然的低溫敏感性啟動子PCspA為對照，發(fā)現(xiàn)P129和P3各方面的特性均與PCspA類似。最佳表達溫度為15 ℃；持續(xù)表達時間長達45 h；最佳表達的菌齡在對數(shù)生長早期（OD600為0.4左右）。以D15基因檢驗了P129和P3的表達蛋白的效果。發(fā)現(xiàn)P3啟動子的效果與用熒光蛋白檢測的結(jié)果一致，即表達強度弱于PCspA啟動子。另外，比對D15基因在T7啟動子下的表達情況，發(fā)現(xiàn)低溫敏感性啟動子未形成包涵體