B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白在果蠅細胞中的表達與純化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：在果蠅表達系統(tǒng)中表達并獲得高純度的B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitisBvirusXprotein，HBx)。 方法：PCR擴增獲得B、C基因型乙型肝炎病毒X基因(分別為Xb及Xc)，以AgeI及BgllI位點將其克隆入果蠅表達載體pMT／BiP／V5／HisC，構建相應的重組表達載體。重組載體與篩選質粒pCoBlast以脂質體Cellfectine共轉染果蠅S2細胞，25gg／mlBlasticidin篩選

2、獲得多克隆抗性細胞株。擴增細胞并以CuS04誘導HBx蛋白表達，Western—Blot鑒定表達產物并確定最佳的蛋白表達時間和誘導濃度。大規(guī)模培養(yǎng)細胞并誘導表達，用兩種方法純化獲得高純度的B、C基因型HBx。 結果：1、成功構建了B、C基因型乙型肝炎病毒X基因的重組質粒pMT／BiP-Xb'HisC和pMT／BiP-Xc-HisC；2、獲得穩(wěn)定表達HBx融合蛋白的S2細胞株，確定了融合蛋白在S2細胞中表達的最佳時間是誘導后72h

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