1、第一部分 microRNA-4661通過拮抗RNA結合蛋白TTP對IL-10表達進行轉錄后調控的研究
　　 一般來說,miRNA可以通過抑制靶基因翻譯或者誘導靶基因mRNA降解從而對基因進行轉錄后調控,但miRNA對基因調節(jié)的新機制仍受到很多關注。越來越多的miRNA隨著深度測序技術的發(fā)展而被發(fā)現(xiàn),而這些miRNA的生物學功能尚待揭示。miR-4661是一個在胚胎干細胞中被發(fā)現(xiàn)的miRNA,到目前為止,其功能仍不清楚。在此項研究

2、中,我們報道了miR-4661能夠上調TLR配體刺激后的巨噬細胞中IL-10的mRNA水平和蛋白水平。此外,我們的實驗結果顯示miR-4661能夠競爭性地結合IL-103’非翻譯區(qū)(3’UTR)中的AU富含區(qū)(ARE),而這些ARE是RNA結合蛋白特征性的結合區(qū)域。TTP是一個為人熟知的RNA結合蛋白,它能夠介導IL-10 mRNA的快速降解。而miRNA誘導的mRNA降解被認為是較弱的和慢速的,因此miR-4661與IL-103’UT

3、R結合后的凈作用就是妨礙TTP介導的IL-10 mRNA降解,從而延長IL-10的半衰期,上調了IL-10的表達。因此,與RNA結合蛋白競爭性地與同一個靶基因mRNA結合而穩(wěn)定靶基因mRNA,這是一種miRNA的調節(jié)作用的可能機制。同時,我們的研究也揭示了IL-10表達調節(jié)的一種新機制。
　　 第二部分 miR-29通過靶向抑制IFN-γ表達而調控胞內菌感染免疫應答的研究
　　 miRNA是諸多生命過程中重要的調節(jié)因子,

4、調控了多個生物學系統(tǒng),包括哺乳動物的免疫系統(tǒng)。在天然免疫或者獲得性免疫細胞中miRNA具有特異的表達譜,它們對免疫細胞的發(fā)育、分化和功能起了至關重要的調控作用。對于T細胞來說,盡管絕大多數的miRNA在T細胞中表達,但是不同亞型或者不同發(fā)育階段的T細胞,其表達譜不盡相同,這表明miRNA獨一無二的表達譜可能決定了細胞亞型或其功能狀態(tài)。此外,miRNA在天然免疫細胞如巨噬細胞、樹突狀細胞和NK細胞的功能調控中也有重要的作用。IFN-γ／是

5、Th1細胞標志性的細胞因子,在抗感染免疫,尤其是抗李斯特菌和結核桿菌相關的天然免疫和獲得性免疫中起著至關重要的作用。調控IFN-γ的機制非常復雜,網絡狀、多層面的調控以確保IFN-γ的適當表達,我們發(fā)現(xiàn)miR-29a和miR-29b在分泌IFN-γ的細胞中均下調。根據實驗結果以及預測結果顯示IFN-γ可能是miR-29的靶基因,我們推測T細胞活化過程中可能通過某個機制下調了miR-29,從而進一步促進IFN-γ的產生。我們的研究結果表明

6、李斯特菌和結核桿菌感染后,產生IFN-γ的NK細胞、CD4+T細胞和CD8+T細胞中miR-29表達下調,miR-29可通過直接靶向IFN-γ的3’UTR抑制其產生。為了研究miR-29的體內功能,我們制備了miR-29 sponge(GS29)轉基因小鼠,其內源性miR-29的功能被競爭性地抑制。體內結果證實,李斯特菌感染的GS29小鼠血清中IFN-γ含量較高,臟器中細菌殘存量較少；而結核桿菌感染的GS29小鼠有較強的Th1反應,表現(xiàn)