1、2003年巴氏桿菌科成立一個新屬——雞桿菌屬（Gallibacterium），鴨源雞桿菌（Gallibacterium anatis，G.anatis）是雞桿菌屬的代表種。人們對雞桿菌的研究可追溯至上世紀50年代，而由于其引發(fā)宿主的病癥與其他病原相似，一直沒有給出統一的命名。目前，部分學者認為雞桿菌是一類條件致病性細菌，能夠在宿主體內上呼吸道和下生殖道等部位生存。當機體受到外界刺激時，雞桿菌隨即大量增殖，可能沖破其免疫屏障并損害宿主。大

2、量人工感染試驗證明雞桿菌具有侵襲性，能夠由侵入部位擴散到內臟各器官。但根據目前的試驗結果，對雞桿菌的致病機制仍然無法了解透徹。因此，大家關于雞桿菌的致病性仍然沒有統一的定論。2010年，丹麥學者Kristensen等首次發(fā)現鴨源雞桿菌的體外分泌蛋白(Gallibacterium toxinA，GtxA)，該毒素蛋白具有損傷白細胞活性和溶血活性。本課題首次開展了鴨源雞桿菌對小鼠的致病性研究;在體外原核表達了鴨源雞桿菌蛋白GtxA，并且探究

3、GtxA對雞外周血淋巴細胞的毒性影響;利用GtxA蛋白為包被抗原，建立抗GtxA蛋白間接ELISA方法，并在實際生產中得到應用。
　　1.鴨源雞桿菌對小鼠的致病性試驗
　　為了解鴨源雞桿菌對小鼠的致病性，將實驗室自行分離、鑒定并保存的8株鴨源雞桿菌分別腹腔注射小鼠，觀察小鼠攻毒后的反應及病癥變化。結果表明本研究8株受試鴨源雞桿菌株中，同一CFU的不同菌株呈現出不同的致病力，其中YU-PDS-RZ-1-SLG株細菌毒力較強。攻

4、毒死亡的小鼠各組織器官出現明顯的敗血癥的病變，肝、脾尤為突出，其次為腸道，心、肺等器官病變不明顯。其中YU-PDS-RZ-1-SLG株、YU-XX-HJ-4-SLG株和SHAN-XY-1-GZ株引起的致肝、脾臟病變較為嚴重。結果顯示出從感染母雞輸卵管中分離出的鴨源雞桿菌毒力強于從其他臟器分離出的菌株，表明鴨源雞桿菌的毒力強弱可能與其臟器的不同分離部位有關。
　　2.鴨源雞桿菌GtxA體外表達與其對雞外周血淋巴細胞的毒性作用

5、　　為了解鴨源雞桿菌毒素蛋白GtxA的毒力作用，利用大腸桿菌表達系統體外表達重組蛋白GtxA、該蛋白的N端結構域和C端結構域。體外重組蛋白經過活性鑒定后作用到雞外周血淋巴細胞。通過MTT法檢測細胞的受損程度，表明重組蛋白不但能夠抑制淋巴細胞的增殖，而且表現出明顯的細胞毒性作用。N端結構域作為獨立的元件不能表現毒性作用，但是能夠促進毒素蛋白GtxA發(fā)揮毒性作用。外周血淋巴細胞在受到GtxA蛋白刺激后，使得自身細胞生長受阻，抑制細胞因子的分

6、泌。
　　3.抗鴨源雞桿菌蛋白GtxA抗體間接ELISA方法的建立與初步應用
　　目前，人們認為鴨源雞桿菌擁有多個血清型且血清型之間的交叉保護能力較差。最新發(fā)現的毒力蛋白GtxA可能存在多個血清型之間。將體外表達的GtxA蛋白作為包被抗原，建立抗鴨源雞桿菌毒素蛋白GtxA抗體間接ELISA檢測方法。通過對2013年河南省不同地市680份雞血清進行抗體水平檢測，檢測出陽性樣品129份，陽性檢出率為19.06％。而用已報道的EL

7、ISA方法檢測出陽性樣品147份，陽性率為21.62％。兩種方法檢測出同為陽性的血清有125份，同時為陰性的有544份。故本文建立的方法陽性符合率為96.89％(125/129)，陰性符合率為98.73％(544/551)，總符合率為98.38％(669/680)。
　　結果顯示幾乎全部受檢雞場均出現G.anatis抗體陽性的情況，平均抗體陽性率為19.06％，其中鄭州地區(qū)的感染率較高。較之2011年我國部分地區(qū)鴨源雞桿菌流行情況