凋亡相關新基因apr-2的克隆、表達及多克隆抗血清的制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、我們通過克隆apr-2編碼區(qū)基因,獲得APR-2原核表達蛋白和抗血清,為進一步對該基因的研究奠定基礎.該研究進行了如下四方面實驗:1.利用全反式維甲酸(ATRA)建立HL-60細胞凋亡模型,提取HL-60凋亡細胞總RNA,根據(jù)GeneBank中apr-2 cDNA編碼區(qū)序列設計引物,采用RT-PCR方法獲取apr-2 cDNA編碼區(qū)序列,回收純化后與PGEM-T Easy載體連接,轉化大腸桿菌,構建重組克隆載體PGEM-T Easy/a

2、pr-2,進行序列分析.2.測序正確后,將目的片段亞克隆入PGEX-4T-2原核表達載體,轉化大腸桿菌,異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導重組融合蛋白小樣表達,確定目的基因的表達情況后,進一步大量表達,利用凝膠自動掃描分析目的蛋白在細菌中的表達分布.運用電洗脫方法對獲得的融合蛋白進行初步純化.3.用獲得的融合蛋白免疫新西蘭大白兔,制備兔多克隆抗血清,飽和硫酸胺法純化,酶聯(lián)免疫反應(ELISA)檢測抗血清滴度,運用Western

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