

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:構(gòu)建人真核表達的hTAZ慢病毒載體pLenti6/V5-hTAZ,轉(zhuǎn)染293FT細胞獲得重組慢病毒顆粒,研究hTAZ對前成骨細胞MC3T3-E1分化的調(diào)控作用。
方法:將已經(jīng)過測序驗證的,含有hTAZ基因慢病毒入門質(zhì)粒pENTR221-hTAZ通過LR反應克隆到慢病毒載體pLenti6/V5-DEST中。對重組質(zhì)粒進行酶切鑒定并在細胞中驗證表達。將該重組載體和慢病毒包裝質(zhì)粒充分混合,用陽離子脂質(zhì)體Lipofactamin
2、e轉(zhuǎn)染293FT細胞,培養(yǎng)和待細胞完全裂解后收集富含hTAZ基因的慢病毒顆粒上清液,取適量上清液感染MC3T3-E1細胞,采用殺稻瘟菌素(Blastcidin)篩選,建立了穩(wěn)定過量表達hTAZ蛋白的MC3T3-E1/hTAZ細胞系。用條件培養(yǎng)基誘導MC3T3-E1和MC3T3-E1/hTAZ細胞成骨、成脂分化,vonKossa和茜素紅染色比較MC3T3-E1和MC3T3-E1/hTAZ成骨分化程度差異;油紅O染色比較其成脂分化差異,考察
3、hTAZ基因過表達對前成骨細胞分化的影響。
結(jié)果:凝膠電泳和測序結(jié)果均證明hTAZ重組慢病毒載體pLenti6/V5-hTAZ構(gòu)建正確,并能在細胞中正確表達。與輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)包裝細胞獲得慢病毒顆粒,并成功感染MC3T3-E1細胞。vonKossa染色和茜素紅染色結(jié)果表明,MC3T3-E1/hTAZ細胞成骨分化強于未轉(zhuǎn)染細胞,而其成脂分化受抑制。
結(jié)論:本研究構(gòu)建了人真核表達的質(zhì)粒載體pLenti6/V5-hTAZ,并能
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- Rap1b對鼠前成骨細胞(Mc3T3-E1)成骨分化早期的影響.pdf
- 8-Prenylnaringenin(8-PN)對小鼠成骨細胞MC3T3-E1分化影響的實驗研究.pdf
- caveolin-1對成骨細胞MC3T3-E1增殖分化過程的調(diào)節(jié)作用.pdf
- 鐵調(diào)素對小鼠成骨細胞(MC3T3-E1)成骨活性基因表達的影響.pdf
- 殼寡糖-膠原復合凝膠對前成骨細胞MC3T3-E1的影響及作用機制初探.pdf
- Ch-GNPs-β6復合物對小鼠胚胎成骨細胞前體細胞MC3T3-E1增殖和分化的影響.pdf
- 杜仲對MC3T3-E1成骨細胞及OPG-RANKL比值的影響.pdf
- 格列齊特對小鼠成骨細胞樣細胞MC3T3-E1增殖、分化及凋亡的影響.pdf
- 瘦素對小鼠成骨細胞MC3T3-E1增殖及OPG-RANKL mRNA表達的影響.pdf
- 辛伐他汀對小鼠前成骨細胞MC3T3-E1增殖、凋亡及OPG mRNA RANKL mRNA水平的影響.pdf
- 骨碎補有效成分柚皮苷對小鼠成骨細胞MC3T3-E1的增殖、分化和礦化的影響.pdf
- 麗江大黃中四種成分對小鼠顱頂前成骨細胞MC3T3-E1增殖分化的影響.pdf
- PTH對MC3T3-E1細胞分化過程中Cbfα1表達的影響.pdf
- 格列喹酮對MC3T3-E1成骨細胞增殖及凋亡的影響.pdf
- IL-17A對前成骨細胞MC3T3-E1功能的影響及其依賴AKT2的初步機制研究.pdf
- 松脂素二葡萄糖苷對MC3T3-E1成骨細胞OPG以及RANKL表達的影響.pdf
- 鋅協(xié)同三羥異黃酮對成骨細胞MC3T3-E1增殖的影響.pdf
- 磺脲類藥物對小鼠成骨細胞MC3T3-E1自噬、凋亡和功能的影響.pdf
- 格列吡嗪對小鼠成骨細胞MC3T3-E1增殖、凋亡及COL-1基因表達的影響.pdf
- 自噬抑制氟誘導的成骨細胞MC3T3-E1凋亡作用分析.pdf
評論
0/150
提交評論