1、第一部分人MxA基因重組真核載體的構建及鑒定 目的：在前期獲得含有目的基因MxA的PAdtrack-MxA(含MxA的重組腺病毒穿梭質粒)基礎上，應用真核載體PcDNA3.1構建重組真核載體PcDNA3.1-MxA。 方法：在大腸桿菌JM109中擴增獲得含有目的基因MxA的PAdtrack-MxA和PcDNA3.1，使用兩者共同的限制性內切酶Xba Ⅰ、NotⅠ進行雙酶切，并連接以構建重組真核載體PcDNA3.1-MxA

2、，然后通過氨芐青霉素抗性篩選，雙酶切及PCR鑒定，選取鑒定正確的克隆測序，并應用DNAssist 2.0軟件對序列與前期獲得的基因序列以及已知GenBank中MxA基因序列進行同源性分析。 結果：經(jīng)限制性內切酶、PCR鑒定重組真核載體PcDNA3.1-MxA構建成功。測序結果表明本實驗所克隆片段長2012bp，包含人MxA基因序列，核苷酸序列分析表明與前期獲得的目的基因序列完全相同，而與GenBank中人MxA基因序列同源性也達

3、99.75％，僅有5個堿基不同，且所編碼的氨基酸僅1個發(fā)生改變，此氨基酸位于MxA蛋白的非功能區(qū)。 結論：重組真核載體PcDNA3.1-MxA構建成功，為下一步研究重慶市衛(wèi)生局資助項目編號：03125MxA抗乙型肝炎病毒作用奠定了基礎。 第二部分人MxA基因重組真核載體抗乙型肝炎病毒作用的實驗室研究 目的：體外研究PcDNA3.1-MxA體外抗HBV的作用，為進一步研究體內抗病毒及臨床應用提供理論和實驗基礎。

4、 方法：將構建成功的重組真核載體PcDNA3.1-MxA轉染入HepG2.2.15，根據(jù)PcDNA3.1-MxA新霉素抗性，使用G418抗性篩選出穩(wěn)定的細胞克隆。將HepG 2.2.15分為實驗組(穩(wěn)定表達PcDNA3.1-MxA的HepG 2.2.15)和對照組(未轉染組)，應用RT-PCR方法檢測兩組HepG2.2.15內MxA mRNA水平的表達，并應用ELISA法檢測兩組HepG2.2.1 5內HBsAg、HBeAg的水平。

5、 結果：經(jīng)濃度梯度篩選顯示G418最適篩選濃度為600μg/ml，并在培養(yǎng)第3周篩選出穩(wěn)定表達PcDNA3.1-MxA的HepG 2.2.15。RT-PCR擴增結果顯示實驗組的MxA mRNA水平均較對照組明顯升高，而且ELISA檢測結果顯示實驗組HBsAg、HBeAg水平明顯低于對照組，其結果具有顯著的統(tǒng)計學意義(P<0.01)。 結論：在HepG 2.2.15內成功轉染并穩(wěn)定表達重組真核載體PcDNA3.1-MxA，