1、本試驗(yàn)采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理，對(duì)戊型肝炎病毒抗原酶聯(lián)免疫試劑的研制及評(píng)價(jià)進(jìn)行研究。在微孔板上預(yù)包被以大腸桿菌表達(dá)HEV ORF2片段的重組抗原免疫家兔制得的HEV多克隆抗體，捕獲樣品中的戊型肝炎病毒抗原，洗板后加入HRP標(biāo)記的大腸桿菌表達(dá)HEV ORF2片段的重組抗原免疫制得的HEV/ORF2/4＃單克隆抗體二次溫育，當(dāng)樣品中存在戊型肝炎病毒抗原時(shí)，將形成“包被抗體-抗原-酶標(biāo)抗體”復(fù)合物，再次洗板后加入TMB顯色劑進(jìn)行溫

2、育，復(fù)合物上連接的HRP使顯色劑生成藍(lán)色產(chǎn)物，終止后變?yōu)辄S色。當(dāng)樣品中無(wú)戊型肝炎病毒抗原時(shí)，不顯色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度（A值）從而判斷樣品中HEV病毒抗原存在與否。
　　本試劑評(píng)價(jià)試驗(yàn)共收集2216例血清樣本。其中（以臨床背景計(jì)）疑似戊型肝炎患者樣本722例;未感染戊肝病毒的患者樣本116例;其它肝病等易混病例及普通人群樣本1494例?？己嗽噭z出126例陽(yáng)性結(jié)果，258例陰性結(jié)果;HEV RNA方法檢出162例陽(yáng)性結(jié)果，222

3、例陰性結(jié)果。用HEV RNA方法檢測(cè)為陽(yáng)性的162例樣本中，考核試劑檢測(cè)陽(yáng)性的樣本為103例，考核試劑與HEV RNA方法陽(yáng)性符合率為64％;在HEVRNA方法檢測(cè)為陰性的222例樣本中，考核試劑檢測(cè)陰性的樣本為199例，陰性符合率為90％;考核試劑與HEV RNA檢測(cè)方法比較，敏感度略低于PCR方法，但抗原檢測(cè)的檢出譜高于PCR方法，比PCR更具有一定的實(shí)用價(jià)值，且操作更為簡(jiǎn)便。
　　本試劑具有以下特點(diǎn):1）本試劑可檢測(cè)人血清或

4、血漿中的HEV抗原，含有EDTA、檸檬酸鈉或肝素等抗凝劑的樣品可用于本試劑檢測(cè)，不能檢測(cè)含懸浮纖維蛋白或聚集物、重度溶血的樣品;2）本試劑具有很高的診斷靈敏度，特異性強(qiáng)，重復(fù)性以及穩(wěn)定性良好;3）本試劑操作簡(jiǎn)單快速，對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)施、儀器設(shè)備、環(huán)境和操作人員要求低，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程僅需105分鐘，便于醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)開(kāi)展HEV檢驗(yàn)工作;4）本試劑與HEV RNA檢測(cè)方法比較，敏感度略低于PCR方法，但抗原檢測(cè)的檢出譜高于PCR方法，比PCR更具有一定