1、目的：構建miR-20a基因的miRNA Sponge載體，建立Jurkat-S穩(wěn)定細胞株，為進一步研究miR-20a功能及應用干擾技術治療奠定基礎；檢測急性白血病患者中miR-17、miR-20a前體的表達情況并探討miRNA Sponge介導的miR-17、miR-20a沉默的抗白血病作用機制。
　　方法：設計、合成一對含有2個重復針對miR-20a成熟序列第9-12堿基錯配的序列，并帶有酶切位點，退火后連接到pCDNA3.0

2、-L表達載體上；載體雙酶切后再與退火產(chǎn)物連接，重復4次，酶切及熒光素酶活性鑒定；亞克隆到慢病毒表達載體，與psPAX2、PMD2G共轉染HEK293T細胞，包裝產(chǎn)生慢病毒顆粒并測定病毒滴度，感染高表達miR-17、miR-20a的Jurkat細胞株；應用real-time PCR和Western blot技術分別檢測Jurkat-S穩(wěn)定細胞中P21及E2F1 mRNA和蛋白水平的表達，并與對照組進行比較；CCK-8方法及流式細胞儀方法分

3、別檢測miR-17、miR-20a沉默對Jurkat細胞增殖能力及細胞周期的影響。采用real-time PCR方法檢測初治急性白血病患者及白血病細胞株中miR-17、miR-20a前體的表達水平，分析其在各型白血病中的表達情況。
　　結果:成功構建針對miR-20a基因的Sponge載體，病毒滴度為5×107TU/ml；建立穩(wěn)定轉染的Jurkat-S細胞株，有效干擾驗證顯示miR-20a Sponge能明顯上調P21及E2F1的

4、mRNA及蛋白水平，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；初治急性白血病患者中miR-17、miR-20a前體的表達明顯高于正常對照(p<0.05)；且與急性髓系白血病患者相比，急性淋巴細胞白血病患者中的表達量更高；然而二者表達量與患者外周血白細胞水平無明顯相關性(p>0.05)；miR-17、miR-20a沉默能抑制Jurkat細胞的增殖，且導致細胞周期阻滯于G1-S期。
　　結論：成功構建miR-20a基因的miRNA Spong