抗hTNF-α單克隆抗體的制備及其抗體基因克隆研究.pdf_第1頁(yè)
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1、腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factotα,TNFα)是一種由活化的單核/巨噬細(xì)胞分泌的多功能細(xì)胞因子,研究表明:適量的TNFα可以協(xié)助宿主抵抗微生物入侵、殺傷某些腫瘤細(xì)胞或使體內(nèi)腫瘤組織發(fā)生出血壞死,但過(guò)量的TNFα與其它炎性因子一起產(chǎn)生多種病理性損傷,可以引起組織損傷、重癥感染性休克、自身免疫性疾病等??梢哉f(shuō)TNF-α作為一個(gè)調(diào)節(jié)生理平衡的關(guān)鍵細(xì)胞因子,在人類(lèi)對(duì)抗腫瘤及其他疾病中扮演了“雙刃劍”的角色。
  

2、 通過(guò)抑制TNFα的活性作用可以對(duì)與TNFα有關(guān)的疾病產(chǎn)生治療作用,目前主要用于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、抑制腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移以及對(duì)多藥耐藥的治療。以TNFα為靶點(diǎn)開(kāi)發(fā)的藥物包括有很多,這些藥物從不同層次不同水平抑制TNFα的產(chǎn)生和發(fā)生作用從而達(dá)到抗TNFα治療的目的。臨床研究表明抗TNFα治療的藥物是安全的。
   本實(shí)驗(yàn)在我室原有抗hTNF-α表達(dá)載體的基礎(chǔ)上,表達(dá)出可溶性hTNFα蛋白,之后用經(jīng)典的細(xì)胞融合的方法獲得抗hTNF

3、α的雜交瘤細(xì)胞株;采用硫酸銨沉淀和蛋白G親和層析法純化腹水型單抗;采用ELISA酶鏈免疫分析方法測(cè)定其效價(jià)、抗體亞型和親和力;采用MTT法測(cè)定抗體阻斷hTNFα對(duì)L929細(xì)胞的細(xì)胞毒的作用和篩選拮抗型抗hTNFα單抗;流式細(xì)胞儀法測(cè)定抗體阻斷hTNFα誘導(dǎo)L929細(xì)胞凋亡的作用。最終獲得一株能穩(wěn)定分泌抗hTNFα抗體的雜交瘤細(xì)胞株XB10,分泌的抗體亞型為IgG2;該抗體能高親和力與hTNFα結(jié)合,特異性阻斷hTNFα對(duì)L929細(xì)胞的細(xì)

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