1、大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)人核糖核酸酶抑制因子體內(nèi)抑制B16黑色素瘤生長姓名：王艇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：崔秀云20040601霉素篩選標(biāo)記(neo)。該載體質(zhì)粒一旦被轉(zhuǎn)染入包裝細(xì)胞系PA317[Ip可被其表達(dá)的逆轉(zhuǎn)錄病毒外殼蛋白所包裝，從而形成有感染力，卻復(fù)制缺陷型的逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒。目的：研究逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLNCX介導(dǎo)人核糖核酸酶抑制因子(hRI)的基因治療系統(tǒng)經(jīng)靜脈途徑能否實(shí)現(xiàn)在腫瘤實(shí)

2、驗(yàn)動(dòng)物模型小鼠體內(nèi)有效轉(zhuǎn)染、表達(dá)，從而通過抗血管生成產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)，本實(shí)驗(yàn)還要檢測該系統(tǒng)對(duì)小鼠血液和骨髓的安全性。方法：經(jīng)包裝細(xì)胞系PA317體外包裝，攜帶hRI的cDNA序列的重組轉(zhuǎn)錄病毒載體經(jīng)與NaCI和聚乙二醇6000(PEGfi000)共沉淀并離心濃縮。再經(jīng)SepharoseCL一4B凝膠層析純化后，經(jīng)過在NIH／3T3成纖維細(xì)胞系上的病毒滴度測定，以空載體及PBS緩沖液等為對(duì)照，經(jīng)靜脈注射給皮下接種B16黑色素瘤的C57BL／

3、6J0鼠體內(nèi)，以病理及免疫組織化學(xué)檢測目的基因hRl在小鼠骨髓、肝臟和脾臟等體內(nèi)各臟器的表達(dá)水平，腫瘤血管生成，觀察hRI通過抗血管生成對(duì)黑色素瘤生長的抑制作用。以外周血細(xì)胞記數(shù)血液生化和骨髓染色體檢測評(píng)價(jià)病毒載體對(duì)機(jī)體造血系統(tǒng)的影響。結(jié)果：轉(zhuǎn)染的hRi基因產(chǎn)物在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)有效地表達(dá)，并對(duì)B16黑色素癟表現(xiàn)出了抗血管生成效應(yīng)，能抑制黑色素瘤的生長，同時(shí)不伴有明顯的對(duì)遣血系統(tǒng)的影響，同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)hRI在腫瘤纖維包膜中的成纖維細(xì)胞有高表達(dá)