1、持久性有毒物質(zhì)(PersistentToxicSubstances，PTSs)能夠抵抗光分解、化學(xué)分解和生物降解作用，通過大氣、淡水和海洋的流動(dòng)發(fā)生遠(yuǎn)距離乃至全球范圍的擴(kuò)散轉(zhuǎn)移，表現(xiàn)為持久而廣泛地分布于自然界中，同時(shí)具有高疏水性特征，并且能夠在生物體內(nèi)形成富集，干擾機(jī)體內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能，影響體內(nèi)激素的合成、釋放、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝及結(jié)合等過程，干擾血漿中正常激素水平的維持，對(duì)機(jī)體的生殖發(fā)育障礙、腫瘤發(fā)生、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等多方面產(chǎn)生影響；而且

2、此類物質(zhì)可以通過食物鏈產(chǎn)生生物放大效應(yīng)。目前，對(duì)PTSs的關(guān)注已經(jīng)由原來(lái)的僅僅是自然環(huán)境、野生生物而擴(kuò)大到今天的人類健康。針對(duì)三峽水庫(kù)蓄水后，重慶地區(qū)水環(huán)境發(fā)生巨大變化，據(jù)前期曹佳、舒為群教授等研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)江、嘉陵江優(yōu)勢(shì)污染物鄰苯二甲酸二丁酯(Dibutylphthalate，DBP)最高濃度達(dá)9.48μg/L，而從主城區(qū)5個(gè)自來(lái)水廠出廠水中共檢測(cè)出82種有機(jī)污染物，其中以嘉陵江為水源的出廠水檢測(cè)出63種，以長(zhǎng)江為水源的出廠水檢測(cè)出30種

3、，對(duì)污染狀況與人群健康的研究刻不容緩。為深入了解現(xiàn)階段PTSs污染的狀況及其對(duì)健康的遠(yuǎn)期危害，以及了解人群健康效應(yīng)的變化狀況，故而我們分別從實(shí)驗(yàn)室在細(xì)胞和分子水平觀察三峽庫(kù)區(qū)水優(yōu)勢(shì)污染物鄰苯二甲酸二丁酯的神經(jīng)細(xì)胞毒性效應(yīng)，并且深入人群研究，觀察環(huán)境因素與兒童行為認(rèn)知發(fā)育異常的相關(guān)關(guān)系，為促進(jìn)人群健康提供科學(xué)依據(jù)。 方法： 1.實(shí)驗(yàn)室研究：(1)體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞株P(guān)C12細(xì)胞，培養(yǎng)基分別含有5，12.5，25，50，100

4、，200mg/LDBP，作用24，48，72和96小時(shí)后，用細(xì)胞計(jì)數(shù)CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的存活和生長(zhǎng)；臺(tái)盼藍(lán)拒染法繪制生長(zhǎng)曲線；(2)乳酸脫氫酶(LDH，Lactatedehydrogenase)釋放檢測(cè)細(xì)胞損傷程度；DNTB法測(cè)定谷光苷肽過氧化物酶(GSH-Px，Glutathioneperoxidase)活性，丙二醛比色法測(cè)定丙二醛(MDA，Malondialdehyde)含量；(3)DNA凝膠電泳檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。(4)RT-PC

5、R檢測(cè)p53，Bcl-2，Bax等凋亡相關(guān)基因表達(dá)變化情況。 2.流行病學(xué)研究：以24例行為認(rèn)知發(fā)育異常兒童為病例、96名行為認(rèn)知發(fā)育正常兒童為對(duì)照，進(jìn)行1∶4匹配病例對(duì)照研究。病例和對(duì)照均來(lái)自重慶市婦幼保健院兒童保健科常規(guī)保健兒童。同時(shí)，按病例對(duì)照分組隨機(jī)抽樣獲取10％兒童，進(jìn)行外環(huán)境暴露因素測(cè)量。數(shù)據(jù)處理采用條件Logistic回歸進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果： 1.實(shí)驗(yàn)室研究：CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示濃度在12.5～

6、200mg/L的DBP劑量暴露對(duì)PC12細(xì)胞株處理24～96小時(shí)，對(duì)PC12細(xì)胞生長(zhǎng)存在顯著的抑制作用，并呈劑量－效應(yīng)關(guān)系。PC12細(xì)胞暴露于DBP48小時(shí)，LDH釋放增多；GSH-Px活性降低，MDA含量增高；DNA凝膠電泳結(jié)果顯示處理組出現(xiàn)明顯的“DNALadder”。DBP在12.5mg/L時(shí)凋亡相關(guān)基因均有相關(guān)表達(dá)，其中p53基因表達(dá)增加，Bax基因表達(dá)增高，Bcl-2基因表達(dá)降低，且與DBP暴露呈劑量相關(guān)關(guān)系。 2.流

7、行病學(xué)研究：重慶市婦幼保健院兒童保健科搜集病例及對(duì)照共120例(病例24人，對(duì)照96人)。男童17組，占70.8％；女童7組，占29.2％；性別比例為2.43∶1。病例組和對(duì)照組平均年齡分別為2.75±1.15和2.75±1.13歲。經(jīng)均衡性檢驗(yàn)，病例組和對(duì)照組性別、年齡分布差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，均衡性良好。 單因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，與行為認(rèn)知發(fā)育相關(guān)的因素有魚類、大蒜、土豆、豆奶、蘋果、梨子、黑木耳、金針菇、銀耳

8、、海帶、紫菜、兒童患哮喘、母親鍛煉習(xí)慣、母親洗澡淋浴時(shí)間、母親染料接觸史、父親食欲下降。 與兒童行為認(rèn)知發(fā)育無(wú)關(guān)的因素有：飲水區(qū)域、性別、民族、父母親職業(yè)、父母親文化程度、家庭居住條件，兒童年齡、出生身長(zhǎng)、現(xiàn)身長(zhǎng)、出生體重、現(xiàn)體重、兒童好動(dòng)性、易分心、易忘記任務(wù)、易感冒、易患牙齦炎及先天性疾病等因素，其他營(yíng)養(yǎng)及飲食特征，母親其他生活習(xí)慣及環(huán)境暴露史，母親其他既往史，父親健康相關(guān)狀況，兒童免疫學(xué)相關(guān)指標(biāo)血清IgA，溶菌酶、性激素水

9、平，雌激素之雌二醇，雄激素之睪酮，血鉛水平。 多因素條件Logistic回歸分析結(jié)果顯示，按照OR值大小排列如下，母乳喂養(yǎng)時(shí)間(OR=0.385，95％CI0.167～0.890)，母親鍛煉習(xí)慣(OR=0.293，95％CI0.133～0.648)，母親洗澡淋浴時(shí)間(OR=85.769，95％CI4.161～1767.867)，大蒜(OR=0.138，95％CI0.021～0.893)，黑木耳(OR=0.009，95％CI0.0

10、00～0.324)，梨子(OR=0.007，95％CI0.000～0.212)，兒童患哮喘(OR=865.931，95％CI10.363～72356.316)，紫菜(OR=293.732，95％CI7.177～12020.984)，金針菇(OR=17.612，95％CI1.839～168.679)。其中以兒童患哮喘與兒童行為認(rèn)知發(fā)育異常的關(guān)聯(lián)最大；母乳喂養(yǎng)期越長(zhǎng)，兒童行為認(rèn)知發(fā)育異常的危險(xiǎn)性越低；母親良好的鍛煉習(xí)慣同樣是保護(hù)性因素；母親

11、更長(zhǎng)的洗澡淋浴時(shí)間則是兒童行為認(rèn)知發(fā)育的危險(xiǎn)性因素；大蒜、梨子、黑木耳的食用是兒童行為認(rèn)知發(fā)育的保護(hù)性因素；而金針菇和紫菜的食用是兒童行為認(rèn)知發(fā)育的危險(xiǎn)性因素。 通過氣相色譜－質(zhì)譜分析和原子吸收光譜法檢測(cè)，病例組和對(duì)照組兒童的食物、飲水、空氣中持久性毒物檢測(cè)結(jié)果不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論： 1.實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)論： (1)采用多劑量鄰苯二甲酸二丁酯對(duì)類神經(jīng)細(xì)胞PC12細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，通過臺(tái)盼藍(lán)染色，CCK

12、-8細(xì)胞增殖檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞生長(zhǎng)曲線等方法的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)鄰苯二甲酸二丁酯濃度達(dá)12.5mg/L時(shí)即對(duì)PC12細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞生長(zhǎng)活性明顯下降，并且呈劑量相關(guān)關(guān)系。 (2)通過乳酸脫氫酶釋放實(shí)驗(yàn)，觀察乳酸脫氫酶在細(xì)胞上清液中的釋放濃度，發(fā)現(xiàn)一定劑量鄰苯二甲酸二丁酯暴露導(dǎo)致PC12細(xì)胞乳酸脫氫酶釋放增多，并且呈對(duì)數(shù)相關(guān)關(guān)系，提示細(xì)胞膜損傷作用的存在。 (3)通過谷胱甘肽過氧化物酶活性和丙二醛含量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，觀察在細(xì)胞上清液中谷胱甘肽過

13、氧化物酶活性變化以及丙二醛含量的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)一定劑量鄰苯二甲酸二丁酯暴露導(dǎo)致PC12細(xì)胞的谷胱甘肽過氧化物酶活性降低，并且呈指數(shù)相關(guān)關(guān)系；鄰苯二甲酸二丁酯暴露導(dǎo)致PC12細(xì)胞的丙二醛含量增多，并且呈對(duì)數(shù)相關(guān)關(guān)系。提示其誘導(dǎo)細(xì)胞脂質(zhì)過氧化，干擾活性氧的平衡，誘發(fā)氧化應(yīng)激。 (4)通過細(xì)胞DNA電泳實(shí)驗(yàn)，在DNA水平觀察"DNALadder"的電泳結(jié)果，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組及5mg/L組鄰苯二甲酸二丁酯暴露未促進(jìn)PC12細(xì)胞凋亡發(fā)生，而12.5

14、mg/L及更高濃度組鄰苯二甲酸二丁酯暴露出現(xiàn)典型DNALadder出現(xiàn)，即促進(jìn)PC12細(xì)胞凋亡發(fā)生。 (5)通過RT-PCR實(shí)驗(yàn)，觀察不同劑量DBP對(duì)細(xì)胞的凋亡家族相關(guān)基因表達(dá)水平，對(duì)PC12細(xì)胞擴(kuò)增P53，Bax，Bcl-2基因，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)為上調(diào)P53和Bax，下調(diào)Bcl-2。說(shuō)明其凋亡作用的實(shí)現(xiàn)與凋亡家族相關(guān)基因P53，Bax，Bcl-2表達(dá)水平調(diào)節(jié)相關(guān)。 2.流行病學(xué)研究結(jié)論：通過流行病學(xué)病例對(duì)照研究，對(duì)120名兒

15、童進(jìn)行有關(guān)流行病學(xué)調(diào)查，Gesell量表發(fā)育測(cè)試，免疫功能指標(biāo)檢測(cè)，性激素水平測(cè)定，血鉛濃度測(cè)定，以及10％兒童外環(huán)境中采用氣相色譜－質(zhì)譜分析以及原子吸收光譜分析對(duì)食物、飲水、空氣的相關(guān)持久性毒物濃度測(cè)定，分析結(jié)果如下： (1)發(fā)現(xiàn)兒童行為認(rèn)知發(fā)育與母乳喂養(yǎng)時(shí)間，大蒜，梨子，黑木耳，金針菇，紫菜，兒童患哮喘，母親鍛煉習(xí)慣，母親洗澡淋浴時(shí)間有關(guān)，與飲水區(qū)域無(wú)關(guān)。 (2)兒童外環(huán)境暴露的抽樣觀察中，鄰苯二甲酸二丁酯及重金屬鉛

16、的污染水平較低，其中食物中未檢出鄰苯二甲酸二丁酯，空氣和飲水中均檢出鄰苯二甲酸二丁酯，但水平很低，分別是0.005～4.3μg/L(水)和0.004～0.13μg/L(空氣)。空氣和飲水樣本的檢出水平在地區(qū)分布上存在一致性的趨勢(shì)，通過城區(qū)采樣點(diǎn)模擬地圖觀察分析，交通發(fā)達(dá)地區(qū)檢出水平較高。未觀察到病例組和對(duì)照組兒童的食物、飲水、空氣中持久性毒物的濃度存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 總之，本文以重慶婦幼保健院2～5歲兒童為研究對(duì)象，觀察與兒童行為