1、本研究用已構建的表達禽(番鴨)呼腸孤病毒s3和S4 ORF2基因的原核表達載體pET-30a/S3、pET-30a/S4 ORF2轉化大腸桿菌BL21，挑取陽性克隆培養(yǎng)，IPTG誘導后裂解菌體作SDS-PAGE，分別出現(xiàn)大小約36KD和43KD的表達產(chǎn)物，經(jīng)Western-blot驗證重組蛋白具有DRV抗原性，通過摸索不同誘導時間、不同誘導所需IPTG濃度、不同誘導溫度優(yōu)化了σ3和σC蛋白的表達條件：對σB，用終濃度為0.5mM的IPT

2、G誘導，于37℃振蕩培養(yǎng)5h；對σC用終濃度為0.8-1.0mM的IPTG誘導，于37℃振蕩培養(yǎng)3h。融合蛋白以包涵體的形式存在，分別采用螯合親和層析和尿素洗滌純化了包涵體中的融合蛋白。 利用純化的DRV重組σC蛋白作為抗原致敏乳膠，并優(yōu)化了致敏乳膠的最佳濃度，溫度和時間，初步建立了檢測DRV抗體的乳膠凝集試驗(LAT)。試驗結果表明，抗體致敏乳膠敏感性高，特異性強，穩(wěn)定性好。σ用1日齡雛番鴨免疫評價了禽(番鴨)呼腸孤病毒衣殼蛋

3、白GB和σC亞單位疫苗在番鴨體內(nèi)的免疫原性。接種σB，σC和σB+σC重組亞單位疫苗的番鴨用相同病毒攻毒后分別出現(xiàn)50％，40％和30％的死亡率，陽性對照組番鴨攻毒后出現(xiàn)70％的死亡率。 根據(jù)本實驗室測得的禽(番鴨)呼腸孤病毒YB株S3和S4 ORF2基因序列，采用SOPMA法、Gamier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schultz法方法預測了其結構蛋白的二級結構，用Hopp-Wroods方法對結

4、構蛋白的親水性進行了分析，用Emini方法預測了σB和σC蛋白的表面可能性，以Jameson-wolf和吳玉章等建立的方法預測了蛋白的抗原指數(shù)，然后綜合分析σB和σC蛋白的B細胞抗原表位。結果顯示σB蛋白B細胞表位可能在136～150、157～167及240～249區(qū)域或其附近，σC蛋白B細胞表位可能15～27、36～49、40～49及90～98區(qū)域或其附近，在這幾被預測的表位均含有β-轉角和無規(guī)卷曲結構。本研究為實驗確定σB和σC蛋白