1、研究背景和目的 腦出血(intracerebral hemorrhage，ICH)是神經系統(tǒng)的常見疾病，具有發(fā)病率高、致殘率高和死亡率高的特點，是影響人類生存及生活質量的最嚴重的疾病之一。近年來開展的立體定向血腫抽吸術較傳統(tǒng)開顱手術具有操作簡單、適應癥寬，損傷小，療效高病死率低等優(yōu)點，是目前治療腦出血的理想方法。但由于立體定向血腫清除術并沒有完全清除血腫，殘存的血液成分繼續(xù)造成組織損傷，某種程度上影響神經功能恢復，因此針對腦出血

2、抽吸術后病理生理機制探討術后用藥非常有必要，但目前血腫抽吸術后藥物干預的基礎研究仍是空白。本實驗詣在探討立體定向血腫抽吸術后血腫腔、腹腔聯用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂(monosialoganglioside，GM1)的腦保護作用，并比較不同途徑給藥腦保護作用的差異，從而為臨床腦出血治療提供實驗基礎。 材料和方法 1.75只健康雄性SD大鼠，隨機分成3組：立體定向血腫抽吸組、抽吸腹腔給藥組和抽吸血腫腔給藥組。 2．

3、將IV型膠原酶0.4u(溶于1ul的生理鹽水)立體定向注入大鼠尾狀核誘導形成腦出血模型，10h后向血腫腔注入尿激酶3000u(溶于5ul生理鹽水)，1h后實施立體定向血腫抽吸術排出血腫。各組均于血腫部位固定留置針。 3．GM1凍干粉針劑2mg/kg(藥物容積5ul)，于抽吸后立即注入血腫腔，注藥時間5min，處死前連續(xù)給藥；腹腔給藥組：給藥劑量為20mg／kg，給藥頻率同上。 4．各組大鼠在注酶后3d斷頭取腦進行腦組織含

4、水量測定。 5．各組大鼠在相應的時間點(注酶后1d，3d，5d，7d)行大鼠神經功能缺損評分，并斷頭取腦。 6．將取出的腦組織標本置4％多聚甲醛(Paraformaldehyde，PFA)中室溫固定3 h，按常規(guī)脫水后石蠟包埋，制備橫斷面5μm厚度切片。 7．行GFAP、AQP4、Caspase-3免疫組織化學染色觀察血腫周圍細胞數目及蛋白表達變化。 8．采用Image-ProPlus圖象分析軟件對免疫組

5、化圖象進行光密度分析；光鏡下3個高倍鏡視野進行陽性細胞計數，腦組織含水量按Eliot公式計算：腦組織含水量=(濕重-千重)／濕重×100％，所有統(tǒng)計結果采用均數±標準差(Mean±SD)表示，用SPSS11.5醫(yī)學統(tǒng)計程序進行單因素方差分析，通過Pearson相關分析計算caspase-3、GFAP細胞計數與神經功能評分間的相關系數，p<0.05有統(tǒng)計學差異，p<0.01有顯著性差異。 結果： 1．單純抽吸組注酶后3d

6、AQP4陽性細胞數及蛋白表達量達高峰。 2．血腫腔、腹腔給藥組同抽吸組比較，腦出血3d時腦組織含水量顯著減少(P<0.05)。 3．血腫腔、腹腔給藥組同抽吸組比較，3d(p<0.05)、5d、7d的GFAP、AQP4、Caspase-3陽性細胞數及蛋白表達量明顯減少，尤其是5d、7d的減少更顯著(p<0.01)。 4．血腫腔、腹腔給藥組同抽吸組比較，3d(p<0.05)、5d、7d的神經功能恢復較顯著，尤其是5d

7、和7d神經功能恢復更顯著(p<0.01)。 5．血腫腔給藥和腹腔給藥組比較，前者3d(p<0.05)、5d、7d的GFAP、AQP4、Caspase-3陽性細胞數及蛋白表達量明顯減少，尤其是5d、7d的減少更明顯(p<0.01)；前者的3d(p<0.05)、5d、7d神經功能恢復顯著，尤以5d、7d差異顯著(p<0.01)；兩組3d腦水含量減少比較無顯著性差異(p>0.05)。 6．抽吸組Caspase-3、GFAP細胞

8、計數與大鼠神經功能評分的相關系數分別為：0.835 0.783。 結論： 1．水通道蛋白4可能參與了腦出血腦水腫形成。 2．單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂有減輕腦出血腦水腫作用，下調水通道蛋白可能是減輕腦水腫的機制之一。 3腦出血神經功能缺損可能與細胞凋亡和反應性星形膠質細胞增生有關。 4．單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂有抑制腦出血細胞凋亡和反應性星形膠質細胞增生作用，抑制腦出血細胞凋亡和反應性星形膠質細胞增