1、一個有震撼力的產(chǎn)品—— 恒 古 骨 傷 愈 （英文名：OsteoKing 中文譯名：骨王）“ 云 南 克 雷 斯 ” 馬力 13191885250,生產(chǎn)基地企業(yè)位于美麗的云南玉溪，冠以“克雷斯”之名，是取英文“Crystal”的譯音，意為“水晶”，用水晶晶瑩、剔透、高潔的本質(zhì)，表達(dá)克雷斯制藥不斷追求高質(zhì)量產(chǎn)品的心愿。,云南克雷斯制藥 Yunnan Crystal Pharmaceutical Co

2、企業(yè)簡介,云南克雷斯制藥,制 造 中 心,營 運(yùn) 中 心,百萬級生產(chǎn)車間,自動灌裝生產(chǎn)線,品質(zhì)的保證,彝藥“恒古骨傷愈”早年原為大理國御藥院皇家御用藥 。上世紀(jì)80年代末至90年代末在云南克雷斯制藥的研發(fā)團(tuán)隊在各界醫(yī)學(xué)專家的協(xié)作下，把這一古方用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段開發(fā)為一個完全具備現(xiàn)代化中藥特點(diǎn)的科技醫(yī)藥產(chǎn)品，這一國家自然科學(xué)基金研究項(xiàng)目在治療股骨頭壞死、骨折、腰椎間盤突出癥、骨關(guān)節(jié)炎方面有獨(dú)特顯著療效。,目前對股骨頭壞死的藥物治療對策,一

3、、世界醫(yī)藥界公認(rèn)骨壞死藥物保守治療的原則是： 降脂：主要是他汀類藥物 纖溶：鏈激酶 、尿激酶 、重組葡激酶等酶制劑 抗凝：低分子肝素類、雙香豆素類衍生物如華法林等 抗炎：雙氯芬酸類及其他抗炎鎮(zhèn)痛口服、外用、栓劑藥物 中國特色的輔助治療藥物：活血化瘀類中藥的二、目前藥物保守治療相對的局限性： 按上述治療原則用藥，西藥需多種聯(lián)合使用才能奏效，費(fèi)用高， 長期使用毒副作用大，遠(yuǎn)期療效并不理想。

4、三、中醫(yī)治療的突破？,中醫(yī)對股骨頭壞死的認(rèn)識 中醫(yī)認(rèn)為疾病發(fā)生原因?yàn)橥庖蚝蛢?nèi)因，而且內(nèi)因外因相互作用，使人體陰陽失去平衡，氣血的失恒而生疾把股骨頭壞死稱為“髀樞痹”、“骨痹”、“骨萎”。其發(fā)生原因如下：①外傷所致②六淫侵襲③邪毒外襲④先天不足⑤七情所傷。 中醫(yī)認(rèn)為與股骨頭壞死病變關(guān)系最為密切的為肝、脾、腎三臟。 腎為先天之本，主骨生髓 ； 肝主筋藏血，與腎同源，兩臟榮衰與共 ； 脾胃

5、為后天這本，萬物生化之源，使脾健胃和， 若脾胃失健運(yùn)，生化氣血無源，則筋骨肌肉 皆無氣以生。,恒古骨傷愈合劑 曾用名速效骨傷愈合劑 成分—三七，紅花，人參，杜仲，黃芪，陳皮，洋金花，鉆地風(fēng)，鱉甲功能---補(bǔ)肝腎,活血益氣，接骨續(xù)筋，消腫止痛，促進(jìn)骨折愈合。 組方合理 、針對病因主治---用于新鮮骨折及陳舊骨折，

6、 股骨頭壞死， 骨關(guān)節(jié)病， 腰椎間盤突出癥,主藥道地的云三七—止血,別名：開化三七、人參三七、田七、金不換、盤龍七。 品質(zhì)以云南，貴州為上品，多年生宿根性草本植物 功能主治：三七具有散瘀止血，消腫定痛之功效。 主治咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外傷出 血，胸腹刺痛，跌仆腫痛?！侗静菥V目》云：

7、“ 三七止血，散血，定痛?！?現(xiàn)代藥理：1，該善血管內(nèi)皮功能，抗血小板黏附，聚集 2，改善高凝狀態(tài)，抗凝，抗血栓 3，改善血液成分，促進(jìn)纖維蛋白原溶解 4，抗炎，鎮(zhèn)痛,主藥藏紅花—活血,別名；紅藍(lán)草、 草紅、刺紅花、杜紅花、金紅花、番紅花 菊科植物 功能主治：活血通徑、散瘀止痛。

8、 用于經(jīng)閉、痛經(jīng)、惡露不行、癥瘕痞塊、跌打 損傷現(xiàn)代藥理； 1，紅花油中含有較高的亞油酸，有降低血脂 及血清膽固醇、軟化和擴(kuò)張動脈、防止動 脈粥樣硬化、增加血液循環(huán) 2，直接或部分對抗a-腎上腺素能受體的作用 而使血管擴(kuò)張 3，紅花

9、黃色素有抗凝血作用 4，抗缺氧，抗炎，鎮(zhèn)痛,主藥人參—補(bǔ)氣,常識；原名“人生”，人參亦屬五加科植物 ，中國稱人參，產(chǎn)于 北美故名西洋或花旗 ，人參產(chǎn)于朝鮮的為高麗參。 功能主治：大補(bǔ)元?dú)?，?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津，益智安神?；瘜W(xué)成分:人參中含有人參皂甙、多種氨基酸、糖類、低分子肽類、 有機(jī)酸、脂肪酸、維生素B、維生素C、菸酸、膽堿、果膠、

10、 微量元素等。皂甙是人參生物活性的物質(zhì)基礎(chǔ) 現(xiàn)代藥理：1、人參的“適應(yīng)原”樣作用：人參對物理的、化學(xué)的、生物的各種有害刺激有非特異性的抵抗能力，使紊亂的機(jī)能恢復(fù)正常，主要表現(xiàn)在血壓、腎上腺、血糖方面的雙向調(diào)節(jié)作用。2、降脂作用。人參對高膽固醇飲食大鼠和高脂血癥患者的血清LDL-C的增加和脂肪肝有改善作用，并能促進(jìn)膽固醇的排泄，防止高膽固醇血癥和動脈粥樣硬化的形成。3、血管內(nèi)皮保護(hù)及擴(kuò)張血管功能4、對內(nèi)分泌垂體—腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)

11、的作用，適量的人參使其功能增強(qiáng)，發(fā)揮較強(qiáng)的抗炎、消腫和鎮(zhèn)痛作用,主藥黃芪—補(bǔ)氣、血,又名：棉芪，綿芪，綿黃芪，棉黃芪，黃蓍，黃耆，箭芪等。多年生草 本，豆科，國家三級保護(hù)植物，名貴中藥材 。漸危種 。功用主治：補(bǔ)氣固表、利水退腫、脫毒生肌，益脾胃，補(bǔ)血、活血之 功效。 化學(xué)成分:含皂甙、多糖、多種氨基酸、葉酸及硒、鋅、銅、鈷、硅、 鉬等多種微量元素?，F(xiàn)

12、代藥理： 1，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生干擾素，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能。 2，加強(qiáng)骨髓造血功能；增強(qiáng)心肌收縮力，改善微循環(huán) 指標(biāo)，改善血液流變學(xué)指標(biāo)。 3，生肌，促進(jìn)組織愈合作用，及抗骨質(zhì)疏松作用. 4，有較好的消除水腫作用。能消除實(shí)驗(yàn)性腎炎蛋白尿 5，降壓作用。 6，用于脾胃氣虛，經(jīng)久不愈的潰瘍等

13、。 7，較廣泛的抗菌作用，保肝作用，調(diào)節(jié)血糖作用。,主藥杜仲—補(bǔ)陽,異名：思仙，木綿、思仲，檰，石思仙，絲連皮、絲楝樹皮，扯絲皮，絲棉 皮，玉絲皮，扯絲片。杜仲科杜仲屬落葉喬木，是我國獨(dú)有的植物“活 化石”，只有一科一屬一種。 功用主治：補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，安胎。 治腰脊酸疼，足膝痿弱，小便余瀝，陰下濕癢， 胎漏欲墮，胎動不安，高血

14、壓?；瘜W(xué)成分：含杜仲膠，糖甙、生物堿、果膠、脂肪、樹脂、有機(jī)酸、維生 素C、維生素E，維生素B及β-胡蘿卜素等，還含有很多人體必 須的微量元素，醛糖、綠原酸。現(xiàn)代藥理：1，杜仲具有愈傷作用 ：杜仲葉可以致大鼠肉芽腫成熟及膠原在肉芽中沉積，促進(jìn)傷口愈合進(jìn)程。2，杜仲具有抗骨質(zhì)疏松作用：杜仲可以促進(jìn)機(jī)體代謝和預(yù)防老年骨質(zhì)疏松,美國航天局認(rèn)為,杜仲可以用來預(yù)防宇航員由于

15、太空失重而引起的骨骼和肌肉的衰退。3，杜仲具有抗補(bǔ)體的作用:抑制過度免疫起到抗炎鎮(zhèn)痛作用。4，骨細(xì)胞增殖作用;杜仲葉提取物能促進(jìn)體外培養(yǎng)骨細(xì)胞增殖和堿性磷酸酶的分泌，推測杜仲葉提取物有直接刺激成骨樣增殖的成分。,主藥鱉甲—補(bǔ)陰,異名：上甲，鱉殼，團(tuán)魚甲，鱉蓋子。為鱉科動物中華鱉的背甲功用主治：具有滋陰潛陽、平肝熄風(fēng)、軟堅散結(jié)之功效?；瘜W(xué)成分：本品含動物膠、骨膠原、角蛋白、17種氨基基酸、 碳酸鈣、磷酸鈣

16、、碘、維生素D及鋅、銅、錳等微 量元素。藥理作用： 1、強(qiáng)壯作用:鱉多糖能明顯提高小鼠耐缺氧能力和抗冷凍作用，可延長小鼠游泳時間，有抗疲勞作用。2、免疫促進(jìn)作用:鱉多糖能顯著提高小鼠空斑形成細(xì)胞的溶血能力，促進(jìn)溶血素抗體生成；并增強(qiáng)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)。 3、其它:本品能抑制結(jié)締組織的增生，可消結(jié)塊；有增加血漿白蛋白的作用。,三七紅花組合,三七紅花,,,抗血小板聚集、粘附,降低纖維蛋白原,溶解血栓

17、,抗凝、纖溶,改善血流變,抗凝血,改善紅細(xì)胞變形性和聚集性,改善血液粘度與血漿粘度,人參杜仲三七紅花,,,活血化瘀改善微循環(huán),降脂,紅花、人參降脂、促排膽固醇,促進(jìn)微循環(huán)，增加毛細(xì)血管通透性,清除骨壞死局部的代謝產(chǎn)物,加快軟組織損傷修復(fù)及水腫吸收,減少炎性滲出物對神經(jīng)末梢的刺激,消腫止痛促進(jìn)骨壞死修復(fù),組合藥理-強(qiáng)壯作用,人參黃芪三七,,強(qiáng)壯滋補(bǔ)作用,含有激活組織細(xì)胞的活性成分,,,抗損傷,抗缺氧,抗疲勞,抗高溫

18、,抗低溫,中樞鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛（適應(yīng)原樣作用）,所有成分,,,豐富營養(yǎng)成分,骨修復(fù)的必備條件,蛋白質(zhì)、有機(jī)酸： 角蛋白、17種氨基酸、低分子肽類、有機(jī)酸、脂肪酸、醛糖、綠原酸膠體物質(zhì)： 杜仲膠、果膠、微量元素果膠、動物膠、骨膠原、樹脂維生素：

19、 維生素B、維生素C、維生素D維生素E，β-胡蘿卜素、膽堿、菸酸、生物堿礦物質(zhì)： 碳酸鈣、磷酸鈣、碘、及鋅、銅、錳等微量元素,抗炎、鎮(zhèn)痛,第二部份 藥 理 研 究,藥理研究結(jié)論證實(shí)本藥具有：增強(qiáng)垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)功能的作用，抑制透明質(zhì)酸酶、軟骨素酶、前列腺素

20、合成酶、5-羥色胺、組織胺等作用而發(fā)揮較強(qiáng)的抗炎、消腫和鎮(zhèn)痛作用。能擴(kuò)張血管、降低外周阻力、增強(qiáng)全身血液循環(huán)。通過抑制血栓烷A2（TXA2）合成酶，激活血小板的腺苷環(huán)化酶及抑制磷酸二脂酶的作用，使TXA2的合成減少，細(xì)胞內(nèi)的環(huán)磷酸腺苷（cAMP）含量增加而發(fā)揮抗血小板聚集和抑制血栓形成的作用。,能使骨膜成骨細(xì)胞活躍，骨痂生長及改建早，促進(jìn)新骨細(xì)胞生成，迅速明顯地促進(jìn)骨折愈合，促進(jìn)股骨頭壞死的修復(fù)。有些成分則通過特異阻斷血管平滑肌的

21、受體操作鈣離子通道，阻斷Ca2+內(nèi)流和細(xì)胞內(nèi)Ca2+釋放，從而使外周血管擴(kuò)張，對因病理因素刺激所致的痙攣小血管的擴(kuò)張作用尤為顯著，從而改善組織器官的微循環(huán)，改善受損組織細(xì)胞的供血供氧。含有多種氨基酸、骨膠原及多種人體所需的微量元素，在骨傷、骨病的治療過程中起著重要的作用，能促進(jìn)骨折愈合、加快骨病康復(fù)，縮短病程。,上述諸多藥理作用共同為股骨頭壞死、腰椎間盤突出癥、骨折、骨關(guān)節(jié)炎的治療創(chuàng)造了極為有利的條件，保證了骨疾康復(fù)所必需的條件，改善

22、人們生活質(zhì)量，增加生命價值。,藥物組成及藥理研究小結(jié),,,降脂 纖溶 抗凝 抗炎鎮(zhèn)痛 提供骨再生的營養(yǎng) 針對病因促進(jìn)骨的再生與修復(fù),作用,第三部份 藥 效 研 究,恒古骨傷愈合劑嚴(yán)格按國藥準(zhǔn)字的要求完成各項(xiàng)研究之后，為深入探其治病的作用機(jī)理，率先按國際標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用現(xiàn)代生

23、物化學(xué)、組織形態(tài)學(xué)、細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)、分子生物學(xué)研究基因調(diào)控水平等先進(jìn)技術(shù)，經(jīng)檢測血脂變化、光鏡、透射電鏡、掃描電鏡觀察，免疫組化、原位雜交、實(shí)時熒光定量PCR等方法檢測VEGF（血管內(nèi)皮生長因子）、cbfα1（成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子-核心結(jié)合因子 ）和BMP-2 (骨形態(tài)發(fā)生蛋白2-促進(jìn)骨再生)基因表達(dá)變化，多層次深入研究，列為國家自然科學(xué)基金研究項(xiàng)目，獲可喜研究成果，受到骨科界權(quán)威專家的高度贊譽(yù)，為中藥治療骨疾提供堅實(shí)的科學(xué)依據(jù)。完成了如

24、下試驗(yàn)：,對大鼠足跖注射蛋清致足腫脹的影響對小鼠腹腔注射醋酸致毛細(xì)血管滲透性的影響對小鼠熱板刺激所致疼痛反應(yīng)的影響對小鼠腹腔注射醋酸致扭體反應(yīng)的影響對大鼠體內(nèi)血栓形成的影響 對實(shí)驗(yàn)性骨折愈合的影響對骨壞死兔模型血脂的影響對兔骨壞死的組織學(xué)和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)研究對兔壞死股骨頭內(nèi)VEGF基因表達(dá)的影響對兔壞死股骨頭內(nèi)cbfα1基因表達(dá)的影響對兔壞死股骨頭內(nèi)BMP-2基因表達(dá)的影響,1、恒古骨傷愈合劑對蛋清致大鼠足跖腫

25、 脹實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示：該產(chǎn)品對蛋清致大鼠足跖腫脹有非常顯著 的抑制作用。（P＜0.05）,2、恒古骨傷愈合劑對小鼠腹腔注射 0.7％醋酸致毛細(xì)血管通透性的實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示：該產(chǎn)品具有顯著地抑制醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加的作用。,3、恒古骨傷愈合劑對熱板刺激小鼠痛閾 的實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示：該產(chǎn)品對熱板致痛有明顯的鎮(zhèn)痛作用。（P＜0.05),4、恒古骨傷愈合劑對小鼠腹腔注射醋酸 致扭體

26、反應(yīng)的實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示：該產(chǎn)品對化學(xué)致痛有顯著的鎮(zhèn)痛作用。,5、恒古骨傷愈對大鼠體內(nèi)血栓形成的實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示：該產(chǎn)品具有明顯抗體內(nèi)血栓形成作用。,6、骨折愈合實(shí)驗(yàn)：,用雙鋸片使家兔造成實(shí)驗(yàn)性完全性橈骨骨干骨折模型，斷端缺損3mm，用陽性藥對照，經(jīng)過放射學(xué)檢查、抗折力測定和病理組織學(xué)檢查。 研究結(jié)論顯示：具有明顯的促進(jìn)骨折愈合的作用。,空白對照組 12天骨折線清晰,陽性對照組12天有少量骨痂形成,恒古骨傷愈給藥組12天，有較多

27、骨痂形成,空白對照組28天局部少量性骨痂形成,陽性對照組28天骨痂形成量有所增加,恒古骨傷愈給藥組28天可見大量骨痂形成,空白對照組40天有較多骨痂形成,陽性對照組40天有大量骨痂形成,恒古骨傷愈給藥組40天骨痂體積較前縮小，骨髓腔已相通，骨小梁連接,抗折力測定,研究結(jié)果顯示：空白對照組實(shí)驗(yàn)第40天的抗折力作用相當(dāng)于陽 性藥對照組的28天、相當(dāng)于恒古骨傷愈組的22 天。

28、,空白對照組：28天骨折愈合病理組織切片骨性骨痂纖細(xì)、不規(guī)則。,陽性對照組：28天骨折愈合病理組織切片骨細(xì)胞不成熟。,恒古骨傷愈用藥組：28天骨折愈合病理組織切片骨髓腔再通。,空白對照組：40天骨折愈合病理組織切片骨性骨痂不規(guī)則。,陽性對照組：40天骨折愈合病理組織切片骨內(nèi)膜細(xì)胞增生。,恒古骨傷愈用藥組：40天骨折愈合病理組織切片可見哈佛氏管內(nèi)外環(huán)板及間盤,恒古骨傷愈用藥組：40天骨折愈合病理組織切片骨小梁正常,病理組織學(xué)檢查：,結(jié)果顯

29、示：該產(chǎn)品有明顯的促進(jìn)骨折愈合的作用，縮短病程。,7、恒古骨傷愈對骨壞死兔模型血脂的影響,脂代謝紊亂是骨缺血壞死的重要原因。 本實(shí)驗(yàn)用新西蘭大白兔，以兩種不同的方法制作骨壞死動物模型，觀察比較恒古骨傷愈對兩種骨壞死兔模型血脂的影響。,方法一：按周氏造模法，將新西蘭大兔分為空白對照組（A組）、模型組（B組）和恒古骨傷愈組（C組），模型組和給藥組肌肉注射醋酸潑尼松龍，造成股骨頭壞死模型； 方法二：參照Yamamoto等的方

30、法，將新西蘭大白兔分為空白對照組（A組）、正常兔服用恒古骨愈組（B組）、模型組（C組）和恒古骨傷愈組（D組），模型組和恒古骨傷愈組采用大腸桿菌內(nèi)毒素（LPS）加甲基強(qiáng)的松龍（MPS）造成股骨頭壞死模型；,兩種方法造模后，恒古骨傷愈組按人與兔體表面積換算用藥量，用恒古骨傷愈合劑灌胃1次/2d。測定血清膽固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）和高密度脂蛋白（HDL）。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果按統(tǒng)計學(xué)方法處理，使用SPSS10.0版統(tǒng)計軟件

31、、t檢驗(yàn)和多變量方差分析處理各組計數(shù)數(shù)據(jù)，結(jié)果如下：,方法一的血脂變化,（注：與A組比較﹡P＜0.01，與B組比較△P＜0.01）,方法二的血脂變化,（注：與A組比較﹡P＜0.01，與B組比較△P＜0.01）,結(jié)果顯示：,骨壞死與脂代謝紊亂密切相關(guān) ；骨壞死模型兔均出現(xiàn)高脂血癥；恒古骨傷愈能使CHOL、TG量明顯降低，HDL量明顯升高，有很好的降脂作用。,8、恒古骨傷愈合劑治療骨壞死的組織學(xué)和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)研究,本實(shí)驗(yàn)用新西蘭大白兔，

32、以兩種不同的方法制作骨壞死動物模型（分組、造模、給藥同實(shí)驗(yàn)7）觀察恒古骨傷愈對兩種骨壞死兔模型壞死股骨頭組織學(xué)和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響。儀器： 光學(xué)顯微鏡：Leica-DM4000B顯微攝影系統(tǒng)（德國） 透射電子顯微鏡：JEM-1011型（日本電子公司） 掃描電子顯微鏡：S-3000N型（日本HITACHI公司） HPIAS-1000高清析度彩色圖象分析系統(tǒng)（國產(chǎn)）,,,方法一的觀察結(jié)果,A組正常股骨頭,B組造

33、模10周髓腔擴(kuò)大，脂肪細(xì)胞融合，小梁變細(xì)、稀疏,C組給藥第8周小梁表面成骨活躍,常規(guī)觀察結(jié)果,光鏡觀察結(jié)果,,,,A組正常股骨頭（B組與A組相似）,B組造模第13周軟骨變薄，小梁紊亂，有油膩感,C組給藥8周，軟骨厚度正常，脂肪較少,透射電鏡觀察結(jié)果,,A組正常骨細(xì)胞及骨基質(zhì),,,B組造模13周小梁髓腔壞死,B組造模13周髓腔出血,,,C組給藥第8周見較多新生骨并有鈣鹽沉著,C組給藥第8周新生骨細(xì)胞,,,方法二的觀察結(jié)果,C組造模

34、第4周骨小梁排列紊亂，有油膩感,C組造模第12周油膩感重，切時易碎,D組給藥第12周小梁紊亂黃膩感較輕,常規(guī)觀察結(jié)果：其中A組（空白對照組）：同方法一的觀察結(jié)果。B組（正常兔服用恒古骨傷愈組）：與A組相似。,光鏡觀察結(jié)果,,,,A組正常股骨頭（B組與A組相似）,C組造模第4周小梁紊亂，較細(xì)，稀疏，髓腔脂肪空泡多,D組給藥第12周小梁表面新生骨多,透射電鏡觀察結(jié)果,,,,,,,,C組造模第4周骨壞死、髓腔出血、膠原紊亂,C

35、組造模第4周骨壞死、髓腔出血重,D組給藥第12 周新生骨形成小梁,D組給藥第12周新生骨小梁與原小梁,D組給藥第12 周毛細(xì)血管多,A組B組相似，均為正常股骨頭骨細(xì)胞及骨基質(zhì),掃描電鏡觀察結(jié)果：,A組正常骨小梁表面膜狀結(jié)構(gòu),A組正常膠原纖維致密，排列規(guī)則,C組造模第16周膜狀結(jié)構(gòu)破壞，成骨活躍,C組造模第4周小梁變薄、變細(xì)，表面附著球蛋白樣結(jié)構(gòu)物,C組造模第4周膠原纖維稀疏紊亂,D組給藥第12周血管,D組給藥第12周成骨活躍,D

36、組給藥第12周膜狀結(jié)構(gòu)尚正常，成骨活躍,組織學(xué)和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察的結(jié)果顯示：,給恒古骨傷愈組變性的骨細(xì)胞較多，壞死的骨細(xì)胞較少；可見較多成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、新生骨細(xì)胞及骨基質(zhì)，并有鈣鹽沉著。掃描電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)骨小梁表面的成骨細(xì)胞較多，骨小梁數(shù)目、厚薄、粗細(xì)，骨小梁表面的膜狀結(jié)構(gòu)的損傷，作為受力支架的骨礦質(zhì)和骨基質(zhì)表面膠原纖維情況等，恒古骨傷愈組均明顯優(yōu)于模型組。恒古骨傷愈對兔骨壞死模型有明顯促進(jìn)壞死骨修復(fù)的作用。,9、恒古骨傷愈對兔壞

37、死股骨頭內(nèi)VEGF基因表達(dá)的影響,VEGF（Vascular endothelial growth factor，血管內(nèi)皮生長因子）是功能最強(qiáng)大的血管生成調(diào)節(jié)因子，內(nèi)源性VEGF在骨修復(fù)中起著十分重要的作用。為了探索中藥恒古骨傷愈合劑治療骨壞死的作用機(jī)理，我們采用低劑量 LPS加MPS模型，通過免疫組化、原位雜交和實(shí)時熒光定量 PCR等技術(shù)，研究了恒古骨傷愈合劑對股骨頭壞死修復(fù)過程中VEGF基因表達(dá)的影響。,免疫組化用：VEGF(MA

38、B-243) SP免疫組織化學(xué)試劑盒 原位雜交用：VEGF mRNA寡核苷酸探針雜交試劑盒 實(shí)時熒光定量PCR用：Opticon 熒光定量PCR儀（美國MJ Research公司）分組：見實(shí)驗(yàn)7的方法二。造模：見實(shí)驗(yàn)7的方法二。給藥：見實(shí)驗(yàn)7的方法二。,A組免疫組化 VEGF RNA表達(dá)陽性 SP ×400,C組免疫組化 造模第16周VEGF mRNA表達(dá)陰性 SP ×400,D組免疫組化 給藥第12周

39、VEGF mRNA表達(dá)弱陽性 SP ×400,A組原位雜交 VEGF RNA表達(dá)陽性 ×200,C組原位雜交 造模第16周EGF mRNA表達(dá)陰性 ×100,D組原位雜交 給藥第12周EGF mRNA表達(dá)弱陽性 ×200,免疫組化結(jié)果：,原位雜交結(jié)果：,實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果:,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的收集由MJ Research Opticon熒光定量PCR反應(yīng)儀自帶軟件完成，使用SPSS10

40、.0版統(tǒng)計軟件，采用單因素方差分析法進(jìn)行數(shù)據(jù)比較。 在服藥后第12周時，恒古骨傷愈組（D組）與模型組（C組）比較，D組股骨頭內(nèi)VEGF mRNA的表達(dá)量較C組明顯增加，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義（p﹤0.05）。,結(jié)果顯示：,VEGF與骨修復(fù)密切相關(guān)，VEGF在骨的形成與修復(fù)改建中發(fā)揮著極重要的作用。 通過免疫組化、原位雜交和實(shí)時熒光定量PCR等技術(shù)檢測并相互印證后所得到的結(jié)果是相互吻合的，恒古骨傷愈合劑可促進(jìn)內(nèi)源性VEGF在壞死股

41、骨頭內(nèi)的表達(dá) ，并能明顯增加表達(dá)量。恒古骨傷愈合劑對正常股骨頭內(nèi)VEGF的表達(dá)無影響。,10、恒古骨傷愈合劑對兔壞死股骨 頭內(nèi)cbfα1基因表達(dá)的影響,cbfα1 (core binding factor α1,核心結(jié)合因子α1)基因的表達(dá)在成骨細(xì)胞發(fā)育、分化和骨鈣化形成過程中起著極其重要的分子開關(guān)作用。 為了探索恒古骨傷愈合劑治療骨壞死的作用機(jī)理，我們采用了低劑量LPS加MPS模型，通過免疫組化和實(shí)時熒光定

42、量PCR等技術(shù)，觀察了恒古骨傷愈合劑對股骨頭壞死修復(fù)過程中cbfα1基因表達(dá)的影響。,免疫組化用：非生物素免疫組織化學(xué)試劑盒 實(shí)時熒光定量PCR用： Opticon 熒光定 量PCR儀（美國MJ Research公司）分組：見實(shí)驗(yàn)7的方法二。造模：見實(shí)驗(yàn)7的方法二。給藥：見實(shí)驗(yàn)7的方法二。,A組免疫組化cbfα1 mRNA表達(dá)陽性 ×200,C組免疫組化 造模第16周cbfα1 mRNA表達(dá)陰性 ×

43、;400,D組免疫組化 給藥第8周cbfα1 mRNA表達(dá)弱陽性 ×400,D組免疫組化 給藥第12周cbfα1 mRNA表達(dá)弱陽性 ×400,免疫組化結(jié)果：,實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果:,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的收集由MJ Research Opticon熒光定量PCR反應(yīng)儀自帶軟件完成，使用SPSS10.0版統(tǒng)計軟件，采用單因素方差分析法進(jìn)行數(shù)據(jù)比較。 在服藥后第12周時，D組與C組比較，D組股骨頭內(nèi)cbfα1 mRNA的

44、表達(dá)量較C組明顯增加，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義（p﹤0.05）。,結(jié)果顯示：,cbfα1基因是成骨特異性轉(zhuǎn)錄激活因子，在成骨細(xì)胞發(fā)育、分化和骨形成過程中起著至關(guān)重要的作用。 通過免疫組化和實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測并相互印證后所得到的結(jié)果是相互吻合的，恒古骨傷愈合劑可促進(jìn)cbfα1在壞死股骨頭內(nèi)的表達(dá)來促進(jìn)壞死骨的修復(fù)，并能明顯增加表達(dá)量。 恒古骨傷愈合劑對正常股骨頭內(nèi)cbfα1的表達(dá)無影響。 這是恒古骨傷愈合劑治療骨壞死的又一主要作用

45、途徑。,11、恒古骨傷愈合劑對兔壞死股骨頭內(nèi) BMP-2基因表達(dá)的影響,BMP-2(Bone morphogenetic proteins-2，骨形成蛋白-2 )基因的表達(dá)在成骨細(xì)胞分化和骨形成過程中起著關(guān)鍵作用。 為了探索恒古骨傷愈合劑治療骨壞死的作用機(jī)理，我們采用了低劑量LPS加MPS模型，通過免疫組化、原位雜交和實(shí)時熒光定量PCR等技術(shù)，研究了恒古骨傷愈合劑對股骨頭壞死修復(fù)過程中BMP-2基因表達(dá)的

46、影響。,免疫組化用：羊多克隆BMP-2抗體原位雜交用：生物原位雜交試劑盒 實(shí)時熒光定量PCR用：Opticon 熒光定 量PCR儀（美國MJ Research公司）分組：見實(shí)驗(yàn)7的方法二。造模：見實(shí)驗(yàn)7的方法二。給藥：見實(shí)驗(yàn)7的方法二。,A組免疫組化BMP-2mRNA表達(dá)陽性 ×400,C組免疫組化 造模第16周BMP-2 mRNA表達(dá)陰性 ×400,D組免疫組化 給藥第12周BMP-2

47、mRNA表達(dá)弱陽性 ×400,A組原位雜交BMP-2 mRNA表達(dá)陽性 ×400,C組原位雜交 造模第16周BMP-2 mRNA表達(dá)陰性 ×400,D組原位雜交 給藥第12周BMP-2 mRNA表達(dá)弱陽性 ×400,免疫組化結(jié)果：,原位雜交結(jié)果：,實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果:,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的收集由MJ Research Opticon熒光定量PCR反應(yīng)儀自帶軟件完成，使用SPSS10.0版統(tǒng)計軟件

48、，采用單因素方差分析法進(jìn)行數(shù)據(jù)比較。 在服藥后第12周時，恒古骨傷愈組（D組）與模型組（C組）比較 ，D組股骨頭內(nèi)BMP-2 mRNA的表達(dá)量較C組明顯增加，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。（p﹤0.05）,結(jié)果顯示：,BMP-2具有極強(qiáng)的誘導(dǎo)骨化的活性。通過免疫組化和實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測并相互印證后所得到的結(jié)果是相互吻合的，恒古骨傷愈合劑可促進(jìn)BMP-2在壞死股骨頭內(nèi)的表達(dá)來促進(jìn)壞死骨的修復(fù)，并能明顯增加表達(dá)量。 恒古骨傷愈合劑

49、對正常股骨頭內(nèi)BMP-2的表達(dá)無影響。,上述藥效研究結(jié)論證實(shí)恒古骨傷愈：,具有明顯的抗炎、消腫作用；具有明顯的鎮(zhèn)痛作用；具有抑制血栓形成，明顯的改善血液循環(huán)及微循環(huán)的作用；可使骨膜成骨細(xì)胞活躍，促進(jìn)新骨細(xì)胞形成，促進(jìn)壞死骨的修復(fù)作用；有明顯促進(jìn)骨小梁的再生和成熟，增加骨密度；具有降脂、抗凝、纖溶和抗炎等多種作用。,對防治骨疾術(shù)后DVT（深靜脈血栓）及對受機(jī)械力損傷的靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)及修復(fù)有顯著作用?？纱龠M(jìn)內(nèi)源性VEGF基因

50、的表達(dá)促進(jìn)血管生成，明顯提高成骨細(xì)胞活性并加速骨形成。可促進(jìn)cbfα1基因的表達(dá)促進(jìn)成骨細(xì)胞發(fā)育、分化、調(diào)控和骨鈣化形成?？纱龠M(jìn)BMP-2基因的表達(dá)而誘導(dǎo)骨化，刺激骨形成。恒古骨傷愈對正常骨形態(tài)及其內(nèi)VEGF、cbfα1和BMP-2的表達(dá)無影響。,恒古骨傷愈合劑藥效研究結(jié)論,研究結(jié)論證實(shí),恒古骨傷愈從根本上解決了治療骨疾病治療核心問題——降脂、纖溶、抗炎、抗凝，改善骨供血狀況及骨營養(yǎng)問題，促進(jìn)骨內(nèi)源性 VEGF （血管內(nèi)皮生長因子

51、 ） 、cbfα1（成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子 -核心結(jié)合因子 ）和BMP-2 (骨形態(tài)發(fā)生蛋白2-促進(jìn)骨再生 )基因表達(dá)；增強(qiáng)成骨細(xì)胞活力，抑制破骨細(xì)胞，促進(jìn)壞死骨修復(fù)從而能有效的使骨疾 (股骨頭壞死、腰椎間盤突出癥、骨關(guān)節(jié)炎、骨折 )患者迅速康復(fù)。 信息來源：中國醫(yī)藥信息(2006.07.12),恒古骨傷愈主治： 新鮮骨折及陳舊骨折 股骨頭壞死 骨關(guān)節(jié)病 腰椎間盤突出癥,四

52、，多中心臨床研究 一、股骨頭壞死 二、骨折 三、腰椎間盤突出癥 四、骨關(guān)節(jié)炎,經(jīng)北京市積水潭醫(yī)院、第一軍醫(yī)大學(xué)附屬醫(yī)院、第三軍醫(yī)大學(xué)附屬醫(yī)院、解放軍昆明總醫(yī)院、上海市第六人民醫(yī)院、昆明醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院、四川省人民醫(yī)院等全國多家三級甲等醫(yī)院進(jìn)行臨床療效觀察，臨床研究結(jié)果統(tǒng)計如下：,治療股骨頭壞死、腰間盤突出癥、骨關(guān)節(jié)病,腰間盤突出癥,有效率達(dá)91.3%,有效率達(dá)83.9%,有效率達(dá)86.

53、4%,疼痛改善效果（97%）,骨折腫脹改善效果（95%）,骨折治愈有效率（98.6%）,平均康復(fù)時間較《臨床骨科學(xué)》的統(tǒng)計縮短一半,安 全 性 研 究 急性毒性實(shí)驗(yàn) 長期毒性實(shí)驗(yàn) 興奮劑檢測 重金屬和有害元素檢測,急性毒性實(shí)驗(yàn)顯示： 小鼠半數(shù)致死量LD50 不能測出，最大耐受量達(dá)到成人 日服量540倍（按體重?fù)Q算）仍未見實(shí)驗(yàn)動物死亡。長期毒性實(shí)驗(yàn)顯示： 以

54、成人用藥量的53倍、26.5倍、13.2倍(按體重?fù)Q算) 連續(xù)用藥，對實(shí)驗(yàn)動物的血液學(xué)、血液生化學(xué)、各重 要臟器進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，均未發(fā)現(xiàn)與藥物相關(guān)的 病理變化。經(jīng)國家興奮劑及運(yùn)動營養(yǎng)測試研究中心檢測： 本品不含興奮劑及麻醉劑。重金屬和有害元素檢測： 經(jīng)美國、香港權(quán)威機(jī)構(gòu)檢測，本品符合國際標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論證實(shí)：本品更安全可靠

55、。,臨床研究證實(shí)恒古骨傷愈合劑具有具有明顯的抗炎、消腫作用；具有明顯的鎮(zhèn)痛作用；具有明顯的改善血液循環(huán)及微循環(huán)的作用；具有明顯的促進(jìn)骨折愈合及加速骨病康復(fù)的作用用藥安全。臨床研究結(jié)論與藥效的研究結(jié)論相一致。,,,恒古骨傷愈合劑國內(nèi)包裝,恒古骨傷愈(骨王)國際包裝,我們的產(chǎn)品-骨病康復(fù)的希望,規(guī)格：25ml*6瓶 每個療程12天 按療程服用 用法：飯后1小時 成人25ml兩日一瓶 6-12歲 一次12ml,恒古骨傷愈具備

56、現(xiàn)代中藥特點(diǎn)：一、速效：相對于傳統(tǒng)治療方法 股骨頭壞死患者3-6月收到明顯效果 骨折愈合時間縮短了一半二、專效：對股骨頭壞死和新舊骨折效果明確 對骨關(guān)節(jié)病、腰椎間盤突出癥有輔助治療作用三、長效：兩天服用一次-方便四、高效：針對病因一種藥解決復(fù)雜的問題,2001年11月骨王研發(fā)團(tuán)隊 圖為經(jīng)骨王治愈股骨頭壞死專家赴上海參加

57、“國粹” 名 的滬港文化交流中心姚秘書優(yōu)產(chǎn)品交流會。 長專程到展位向我企業(yè)參會 專家表示感謝。,2002年10月，上海六院、同濟(jì)醫(yī)院、長征醫(yī)院、長海醫(yī)院、瑞金醫(yī)院及上海第一醫(yī)院進(jìn)行學(xué)術(shù)交流，與會專家一致認(rèn)為：骨王用客觀、科學(xué)、實(shí)證的數(shù)據(jù)為臨床提供了依據(jù)，在臨床應(yīng)用中有很高的實(shí)用價值和廣闊的應(yīng)用前景。,2003年5月，云南省生物

58、資源創(chuàng)新重點(diǎn)項(xiàng)目論證會上，與會醫(yī)界及藥界專家一致認(rèn)為，該品種療效確切，質(zhì)量可控，安全可靠，是我省民族醫(yī)藥的精品，應(yīng)列為云南省生物資源創(chuàng)新重點(diǎn)項(xiàng)目。,2004年4月廈門藥品交易會上，恒古骨傷愈（骨王） 倍受外商青睞。,2008年12月15日榮獲首批國家級高新技術(shù)企業(yè)，并于2009年2月4日在昆明參加云南省科技廳召開的頒證會議。,衛(wèi)生部朱慶生副部長參加了云南克雷斯的捐贈儀式！,大災(zāi)面前有大愛,云南中國人民解放軍第478醫(yī)院也收治了很多

59、的災(zāi)區(qū)傷員，云南克雷斯對此也進(jìn)行了積極的捐助、捐贈，這是傷員康復(fù)返鄉(xiāng)前與醫(yī)務(wù)人員難舍難分的感人場面！恒古骨傷愈合劑因效果良好，也受到了災(zāi)區(qū)傷員的認(rèn)可和感動！,繼承與創(chuàng)新是科技文化的根本使命，理性與規(guī)范是科學(xué)的價值觀核心，求真與獻(xiàn)身是科學(xué)研究的本質(zhì)特征，云南克雷斯制藥研發(fā)團(tuán)隊正是遵循這一原則?！　榇?，產(chǎn)品進(jìn)入美國市場后，深受醫(yī)藥界專家及患者的好評，美國《世界日報》、《美洲文匯報》、美國《醫(yī)藥報》紛紛發(fā)表了題為“耳聽為虛、眼見為實(shí)”及“