1、相差顯微鏡（phasecontrastmicroscope）又稱相襯顯微鏡。在光學顯微鏡的改進過程中，相襯顯微鏡的制造成功和普遍的應用，是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就。在1935年荷蘭學者澤尼克（P.Zernike）提出了相襯法原理，至1941年由德國蔡司工廠誕生了世界上第一臺相襯顯微鏡。它的產(chǎn)生，使人類的視覺在光學顯微鏡下又得到新的擴展。從信息利用的角度來看，人們將它視為光學信息處理概念下的第一個產(chǎn)品，因而獲得了1953年諾貝爾物理學獎

2、。我們知道，人眼只能在光波的波長（顏色）和振幅（亮度）有變化的情況下，才能在顯微鏡下看到被檢物體的存在，但活的生物體多是無色透明的，當光線通過時，波長和振幅變化不顯著，這樣在明場鏡檢下就難于觀察清晰。為了克服這一困難，可以采用一定的措施，如物理、化學處理法、材料經(jīng)固定、染色等過程，使被檢物體的顏色及亮度發(fā)生變化，但這只能觀察已被殺死的材料，而不能觀察到活體狀態(tài)；當然，縮小聚光鏡的孔徑光闌，以增加明暗反差的對比，但這樣不能充分發(fā)揮物鏡數(shù)值

3、孔徑的性能，細微結(jié)構(gòu)仍難于被分辨，同時鏡象亮度也隨之降低；利用暗場、熒光或偏光鏡檢術(shù)，雖然能觀察活體標本，但這些顯微術(shù)都是利用不同的光學原理，達到特定的觀察目的，鏡檢效果局限在一定范圍內(nèi)?？梢娚鲜龃胧┒疾荒艿玫綕M意的鏡檢效果，而采用相襯顯微術(shù)，則能解決上述問題，使無色透明活體標本的細微結(jié)構(gòu)在相襯顯微鏡下變得清晰可見。這種顯微鏡最大的特點是可以觀察未經(jīng)染色的標本和活細胞可以觀察未經(jīng)染色的標本和活細胞。一、一、相差顯微鏡相差顯微鏡的特點的特

4、點相差顯微鏡是一種將光線通過透明標本細節(jié)時所產(chǎn)生的光程差（即相位差）轉(zhuǎn)化為光強差的特種顯微鏡。光線通過比較透明的標本時，光的波長（顏色）和振幅（亮度）都沒有明顯的變化。因此，用普通光學顯微鏡觀察未經(jīng)染色的標本（如活的細胞）時，其形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)往往難以分辨。然而，由于細胞各部分的折射率和厚度的不同，光線通過這種標本時，直射光和衍射光的光程就會有差別。隨著光程的增加或減少，加快或落后的光波的相位會發(fā)生改變（產(chǎn)生相位差）。光的相位差人的肉眼感

5、覺不到，但相差顯微鏡能通過其特殊裝置環(huán)狀光闌和相板，利用光的干涉現(xiàn)象，將光的相位差轉(zhuǎn)變?yōu)槿搜劭梢圆煊X的振幅差（明暗差），從而使原來透明的物體表現(xiàn)出明顯的明暗差異，對比度增強，使我們能比較清楚的觀察到普通光學顯微鏡和暗視野顯微鏡下都看不到或看不清的活細胞及細胞內(nèi)的某些細微結(jié)構(gòu)。二、二、相差顯微鏡相差顯微鏡的成像原理的成像原理鏡檢時光源只能通過環(huán)狀光闌的透明環(huán)，經(jīng)聚光器后聚成光束，這束光線通過被檢物體時，因各部分的光程不同，光線發(fā)生不同程度

6、的偏斜（衍射）。由于透明圓環(huán)所成的像恰好落在物鏡后焦點平面和相板上的共軛面重合。因此，未發(fā)生偏斜的直射光便通過共軛面，而發(fā)生偏斜的衍射光則經(jīng)補償面通過。由于相板上的共軛面和補償面的性質(zhì)不同，它們分別將通過這兩部分的光線產(chǎn)生一定的相位差和強度的減弱，兩組光線再經(jīng)后透鏡的會聚，又復在同一光路上行進，而使直射光和衍射光產(chǎn)生光的干涉，變相位差為振幅差。這樣在相差顯微鏡鏡檢時，通過無色透明體的光線使人眼不可分辨的相位差轉(zhuǎn)化為人眼可以分辨的振幅差（

7、明暗差）。三、三、相差顯微鏡相差顯微鏡的結(jié)構(gòu)和裝置的結(jié)構(gòu)和裝置相差顯微鏡與普通光學顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)是相同的，所不同的是它具有四部分特殊結(jié)構(gòu)：即環(huán)狀光闌、相板、合軸調(diào)節(jié)望遠鏡及綠色濾光片。3.3.合軸調(diào)節(jié)望遠鏡合軸調(diào)節(jié)望遠鏡是相差顯微鏡一個極為重要的結(jié)構(gòu)。環(huán)狀光闌的像必須與相板共軛面完全吻合，才能實現(xiàn)對直射光和衍射光的特殊處理。否則應被吸收的直射光被泄掉，而不該吸收的衍射光反被吸收，應推遲的相位有的不能被推遲，這樣就不能達到相差鏡檢的效果

8、。由于環(huán)狀光闌是通過轉(zhuǎn)盤聚光器與物鏡相匹配的，因而環(huán)狀光闌與相板常不同軸。為此，相差顯微鏡配備有一個合軸調(diào)節(jié)望遠鏡（在鏡的外殼上標有“CT”符號），用于合軸調(diào)節(jié)。使用時撥去一側(cè)目鏡，插入合軸調(diào)節(jié)望遠鏡，旋轉(zhuǎn)合軸調(diào)節(jié)望遠鏡的焦點，便能清楚看到一明一暗兩個圓環(huán)。再轉(zhuǎn)動聚光器上的環(huán)狀光闌的兩個調(diào)節(jié)鈕，使明亮的環(huán)狀光闌圓環(huán)與暗的相板上共軛面暗環(huán)完全重疊。如明亮的光環(huán)過小或過大，可調(diào)節(jié)聚光器的升降旋鈕，使兩環(huán)完全吻合。如果聚光器已升到最高點或降到

9、最低點而仍不能矯正，說明玻片太厚了，應更換。調(diào)好后取下望遠鏡，換上目鏡即可進行鏡檢觀察。4.4.綠色濾光片綠色濾光片由于使用的照明光線的波長不同，常引起相位的變化，為了獲得良好的相差效果，相差顯微鏡要求使用波長范圍比較窄的單色光，通常是用綠色濾光片來調(diào)整光源的波長。Olympus廠家生產(chǎn)的相差顯微鏡在鏡檢時要使用該廠規(guī)定的IF550綠色濾光片作為配套器件。四、四、相差顯微鏡相差顯微鏡的使用范圍、操作步驟及注意事項的使用范圍、操作步驟及注

10、意事項1.使用范圍相差顯微鏡能觀察到透明樣品的細節(jié)，適用于對活體細胞生活狀態(tài)下的生長、運動、增殖情況及細微結(jié)構(gòu)的觀察。因此，是微生物學、細胞生物學、細胞和組織培養(yǎng)、細胞工程、雜交瘤技術(shù)等現(xiàn)代生物學研究的必備工具。2.操作步驟（1）根據(jù)觀察標本的性質(zhì)及要求，挑選適合的相差物鏡。（2）將標本片放到載物臺上。（3）進行光軸中心的調(diào)整。（4）取下一側(cè)目鏡，換上合軸調(diào)節(jié)望遠鏡，調(diào)整環(huán)狀光闌與相板上的共軛面圓環(huán)完全重疊吻合，然后取下合軸調(diào)節(jié)望遠鏡，