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文檔簡介
1、目的:探索以胎盤血為來源的細胞因子誘導的殺傷細胞(即CIK細胞)有效的原代培養(yǎng)方法,及其對腫瘤細胞的殺傷作用,為該細胞在腫瘤過繼免疫的臨床治療提供一定的參考。
方法:在無菌條件下,采集健康足月產(chǎn)胎兒的胎盤臍靜脈血及健康成人的外周血,以Ficoll離心法分別提取單個核細胞,通過定時定量加入INF-γ、IL-2、IL-1、抗CD3單克隆抗體等細胞因子,使胎盤血來源單個核細胞及外周血單個核細胞誘導培養(yǎng)成為CIK細胞。通過流式細胞儀測
2、定細胞的免疫表型,利用CCK試劑在細胞增殖的最高峰時期檢測不同濃度的效應細胞對人肺腺癌細胞株A549,宮頸癌細胞株Hela以及肝癌細胞株HepG2的殺傷作用,以及不同作用時間對腫瘤細胞殺傷率的變化。
結果:1.兩種單個核細胞通過一定量的細胞因子相互聯(lián)合作用,均可培養(yǎng)出活性高數(shù)量大的CIK細胞,胎盤血來源的CIK細胞在培養(yǎng)的第6天左右開始呈對數(shù)增殖,在第15天左右達高峰,增殖的倍數(shù)是第0天的(207.91±20.08)倍,與外周
3、血來源CIK細胞有一定的差異(P<0.05),15天之后兩組CIK細胞均進入增殖的平臺期;2.收集增殖高峰期的兩種CIK細胞,檢測CD3+CD8+和CD3+CD56+的細胞較第0天均有明顯的增長,胎盤血來源的CIK細胞組兩種表型的細胞分別增長了3倍和1000倍,與外周血來源的CIK細胞組相比較,在統(tǒng)計學上具有差異;3.在效應細胞對腫瘤細胞的殺傷性檢測中我們發(fā)現(xiàn):針對A549、Hela及HepG2這三種腫瘤細胞,兩種來源的CIK細胞均表現(xiàn)
4、出了一定細胞毒性,并且CIK細胞的濃度越高其對腫瘤細胞的殺傷率就越高,在效靶比為40︰1組胎盤血來源的CIK細胞對A549的殺傷作用最強(76.59±2.38),與外周血來源的CIK細胞存在差異(p<0.05),對Hela細胞和HepG2細胞的殺傷率分別為(75.54±6.92)和(72.49±3.16),但跟外周血來源組相比存在明顯差異(p<0.01);4.分別比較在相互作用為24,48,72小時的情況下檢測胎盤血來源CIK細胞的殺瘤
5、活性,我們發(fā)現(xiàn)在相互作用時間在48小時時,效應細胞對A549,Hela,HepG2三組腫瘤細胞的殺傷率分別達到了(76.35±2.04),(75.96±4.56),(73.92±2.39),與24小時組存在差異(p<0.05),但我們同時發(fā)現(xiàn)相比較作用48小時與72小時的殺傷率,二者的殺傷力相差甚微,p>0.05,兩組之間無統(tǒng)計學意義,說明CIK細胞在48小左右達到了最大殺傷作用。
結論:1.胎盤血可作為誘導CIK細胞的重要來
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