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文檔簡介
1、選題依據:自古以來,“味甜者佳”就是鑒別黃芪品質的一項重要感官指標,但該指標的物質基礎不明確,缺乏相應的科學研究論證其合理性。同時,2010版藥典規(guī)定,黃芪品質評價的常用指標為毛蕊異黃酮苷和黃芪甲苷的含量,但此指標的評價結果與業(yè)界、實際應用時的評價結果存在著不一致,因此,需要找到新的、更加合理的指標評價黃芪的品質。糖類是黃芪中主要的免疫活性成分,同時影響了黃芪的口感和品質。而且,糖類結構復雜多樣,不同的糖類具有不同的調節(jié)作用,是篩選潛在
2、指標評價黃芪品質的最佳來源。因而,本課題從糖類物質入手,明確了黃芪味甜的物質基礎,論證了依據黃芪甜味高低判別品質的合理性,構建了基于三氟乙酸(TFA)水解技術的糖譜分析方法,為尋找更加合理、科學的黃芪品質評價指標奠定了研究基礎。
目的:明確決定黃芪甜味的化學成分并進行定量分析,量化黃芪藥材的甜度強弱,分析影響黃芪甜味強度的環(huán)境因素,結合黃芪常用的四項質量控制指標和綜合評價方法,論證黃芪“味甜者佳”這一傳統(tǒng)評價方法的合理性。
3、r> 建立基于糖類成分 TFA水解技術的糖譜分析方法,并據此尋找不同栽培方式、不同種屬黃芪中差異性的糖片段,篩選差異糖片段作為潛在的質量評價指標。
方法:根據甜味成分的性質,提取對黃芪甜味有貢獻的化學成分進行定性定量分析,結合現(xiàn)有的黃芪質量評價指標,運用綜合評價分析方法和相關性分析手段,論證味甜的合理性。
利用黃芪中可溶性糖類成分在不同溶劑中的溶解度差異,分級提取不同糖類組分,選擇不同濃度、溫度的 TFA水解溶液對
4、提取的糖類成分進行完全或不完全水解,然后選擇不同的衍生化試劑,運用 GC-MS技術、聚丙烯酰胺凝膠電泳技術實現(xiàn)對糖類片段衍生化產物的分離與檢測,得到具有針對性的糖類指紋圖譜組,結合相關性分析、聚類分析、代謝組學分析等數(shù)據處理手段,篩選得到潛在評價指標。
結果:1.黃芪的甜味主要來源于其中游離的七種成分:葡萄糖、果糖、肌醇、山梨醇、半乳糖醇、蔗糖及甜菜堿,這七種成分的含量高低共同決定了黃芪的甜度。黃芪甜度的大小和黃芪中毛蕊異黃酮
5、苷、黃芪甲苷的含量都具有明顯的正相關性,且甜度評價與綜合評價兩種方法的結果相一致。
2.利用乙?;椒ńY合 GC-MS檢測技術建立黃芪的單糖指紋圖譜,測定單糖類產物后發(fā)現(xiàn):黃芪樣品中的糖類成分主要由葡萄糖、果糖、肌醇、山梨醇、半乳糖醇、木糖、巖藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖和甘露糖構成;以黃芪中阿拉伯糖的物質的量為1,速生黃芪中甘露糖:阿拉伯糖的比值>3.5:1,葡萄糖:阿拉伯糖的比值>4:1,野生黃芪中甘露糖:阿拉伯糖的比值
6、<3.5:1,葡萄糖:阿拉伯糖的比值大于<4:1。
3.利用 ANTS衍生化方法結合聚丙烯酰胺凝膠電泳技術建立黃芪的多糖指紋圖譜發(fā)現(xiàn):黃芪可以依照栽培方式和種屬的不同得到很好的區(qū)分,分子量在540-900 Da(主要為三糖和四糖)之間的黃芪多糖片段可以區(qū)分不同栽培方式黃芪;分子量范圍在360-720 Da(二糖和三糖)之間的黃芪多糖片段可以區(qū)分不同種屬黃芪。
結論:1.在對黃芪甜度的貢獻上,蔗糖的含量高低對黃芪甜度的
7、影響最大,其次為甜菜堿,這兩種成分的含量比較高,對黃芪口感的影響作用也比較明顯。而葡萄糖、果糖、肌醇、山梨醇和半乳糖醇受到含量的限制,對黃芪甜度的影響較小。
2.黃芪中可溶性糖類成分的積累與植物體內其他代謝產物、特別是具有藥理活性的黃酮類、萜類、皂苷類以及多糖類成分的積累具有相關性,而可溶性糖類成分含量積累的多寡,可以運用甜度進行表征。因此,可溶性糖類成分含量積累的多,黃芪的甜度就高,同時具有藥理活性的黃酮類、萜類成分的積累也
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