4-1BB信號在Treg中的免疫調控作用及同種異源Treg對腫瘤細胞直接效應初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分多發(fā)性骨髓瘤患者Treg表達水平及4-1BB信號在Treg中的免疫調控作用
  目的:
 ?。?)研究多發(fā)性骨髓瘤患者Treg的表達水平
 ?。?)探討4-1BB信號對Treg細胞的促增殖作用。
  方法:
  (1)采用免疫熒光和流式細胞術檢測多發(fā)性骨髓瘤患者外周血和骨髓Treg表達;
  (2)采用免疫磁珠法分選CD4+CD25+CD127low/-細胞,利用流式細胞術測定其表面4-1BB

2、表達,同時加入IL-2后測定其4-1BB表達有無改變;
  (3)采用免疫磁珠法富集骨髓瘤原代細胞,與同源PBMC進行腫瘤淋巴細胞混合培養(yǎng),CFSE法測定阻斷4-1BB/4-1BBL信號通路后CD4+CD25high細胞的增殖改變
  結果:
 ?。?)多發(fā)性骨髓瘤患者外周血Treg水平較正常對照組高,多發(fā)性骨髓瘤患者的Treg水平與臨床特征和預后無明顯相關性;
 ?。?)Treg細胞表面構成性表達4-1BB分子

3、,IL-2可上調Treg表面4-1BB表達,
 ?。?)原代骨髓瘤細胞表面高表達4-1BBL分子,通過4-1BB-FC交聯(lián)4-1BBL阻斷4-1BB活化信號能夠抑制Treg增殖.
  結論:多發(fā)性骨髓瘤患者Treg細胞表達水平上調,Treg細胞表面構成性表達4-1BB分子,其介導的4-1BB正向信號可促進Treg細胞增殖,提示4-1BB信號可能為調節(jié)腫瘤微環(huán)境的干預靶點。
  第二部分同種異源Treg對腫瘤細胞直接效應

4、的初步研究
  目的:探討抗原特異性的Treg細胞對腫瘤細胞的直接效應
  方法:
 ?。?)分離正常供體單核細胞,以粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)和重組白細胞介素(IL-4)誘導培養(yǎng)獲得不成熟樹突狀細胞;
 ?。?)以負載腫瘤抗原的樹突狀細胞誘導抗原特異性 Treg體外生成和擴增
 ?。?)把抗原特異性Treg與骨髓瘤細胞系進行體外共培養(yǎng),采用Annexin-V/PI染色法測定骨髓瘤細胞凋亡

5、水平有無改變,采用CFSE測定骨髓瘤細胞增殖是否受抑,采用細胞內因子染色法測定骨髓瘤細胞合成IL-6水平有無改變,
 ?。?)測定活化后CD95L在Treg表面有無上調.
  結果:
  (1)通過形態(tài)和表型特征鑒定證實培養(yǎng)所得不成熟樹突狀細胞;
 ?。?)采用樹突狀細胞能夠誘導Treg體外擴增,7天后擴增效率達10倍
  (3)擴增所得抗原特異性Treg能夠誘導腫瘤細胞凋亡并抑制其增殖,細胞內因子染色提示

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