1、目的：
　　制備左旋聚乳酸-β-磷酸三鈣（ Po ly(L-lac t ic ac id)/β--tricalcium phosphate，PLLA/β-TCP）復(fù)合多孔骨支架，對(duì)其性能、體外細(xì)胞水平及體內(nèi)組織相容性進(jìn)行研究。
　　方法：
　　1.采用溶劑自擴(kuò)散-模壓成型--鹽瀝濾、冷凍干燥法制備了β-TCP含量分別為0、10％、20%、30%、40%、50%的PLLA/β-TCP復(fù)合多孔支架（以下簡(jiǎn)稱純PLLA、P/

2、T10、P/T20、P/T30、P/T40、P/T50）。用掃面電鏡觀測(cè)不同β-TCP含量的復(fù)合多孔支架的微觀形貌，用量重法測(cè)量其孔隙率，用動(dòng)靜態(tài)疲勞試驗(yàn)機(jī)檢測(cè)各組復(fù)合多孔支架的力學(xué)強(qiáng)度。
　　2.各組復(fù)合多孔骨支架接種相同量的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)3天后固定，用掃描電鏡觀察多孔支架爬行細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài)以評(píng)價(jià)骨支架的細(xì)胞相容性。此外，用新鮮培養(yǎng)基作對(duì)照，用各組骨支架浸提液培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，分別于細(xì)胞培養(yǎng)第1天、第3天、第5天及第

3、7天用Cell Counting Kit-8（CCK-8）試劑盒檢測(cè)各組細(xì)胞的吸光度以評(píng)價(jià)骨支架的生物相容性。用含β-TCP的復(fù)合骨支架浸提液及純PLLA骨支架浸提液分別培養(yǎng)C3H10細(xì)胞（小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞）至第7d及第21 d，第7d用萘酚AS-MX堿性磷酸鹽溶液和快速藍(lán)重氮鹽混合染液進(jìn)行堿性磷酸酶染色，第21 d用茜素紅S進(jìn)行鈣鹽沉積染色評(píng)價(jià)P LLA/β-T C P復(fù)合多孔骨支架的骨誘導(dǎo)性。
　　3.選取健康成年新西蘭大

4、白兔30只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組，PLLA組，P/T10組、P/T30組及P/T50組，每組6只。每只大白兔均制備雙側(cè)股四頭肌肌袋、肱二頭肌肌袋及臀肌肌袋，將PLLA組，P/T10組、P/T30組及P/T50組復(fù)合多孔支架植入新西蘭大白兔的肌袋內(nèi)，分別于植入后2月、4月及6月處死每組中的2只兔子，取出骨支架及其周圍0.5c m的組織、肝臟及腎臟，肝腎組織切片行HE染色，骨支架切片行HE染色及VG染色，對(duì)PLLA/β-T CP復(fù)合多孔支架的

5、組織相容性及生物安全性進(jìn)行研究。
　　結(jié)果：
　　1.（1）PLLA/β-TCP復(fù)合多孔支架成白色中空狀、質(zhì)均勻，骨支架表面及橫截面微孔豐富，孔徑多分布于5-400um之間，并具有一定的孔隙交通率。
　?。?）量重法檢測(cè)骨支架孔隙率最大為（65.54±2.03）%，各組復(fù)合骨支架孔隙率隨著β-TCP含量的增加基本呈逐漸降低的趨勢(shì)（P＜0.05）。
　?。?）根據(jù)新西蘭大白兔的橈骨尺寸設(shè)計(jì)，經(jīng)模具加壓的P/T40復(fù)

6、合骨支架的彈性模量及抗彎強(qiáng)度最大，其值分別為（626.07±25.96）MPa及（58.12±1.96）MPa，彈性模量達(dá)到人體松質(zhì)骨水平。
　　2.（1）純PLLA骨支架為疏水性材料，不利于細(xì)胞的粘附生長(zhǎng)。PLLA/β-TCP復(fù)合多孔支架表面粗糙，β-TCP的引入可以改善支架材料的親水性及骨傳導(dǎo)性，有利于細(xì)胞的爬行生長(zhǎng)，各組復(fù)合骨支架的細(xì)胞接種面在掃描電鏡下均可觀察到不同程度的細(xì)胞爬行生長(zhǎng)。
　?。?）經(jīng)各組骨支架浸提液培

7、養(yǎng)的細(xì)胞于各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的光吸收值與新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞的光吸收值相當(dāng)（P＞0.05），說(shuō)明含不同β-磷酸三鈣比例的復(fù)合支架浸提液與培養(yǎng)基近似，骨支架浸提液無(wú)毒性成分，對(duì)MS Cs細(xì)胞無(wú)毒性抑制作用。
　?。?）PLLA/β-TCP復(fù)合多孔支架浸提取液培養(yǎng)細(xì)胞后堿性磷酸酶染色陽(yáng)性及鈣鹽沉積染色陽(yáng)性，表明骨支架具有一定的骨誘導(dǎo)性可能。
　　3.骨支架植入后2月，未見(jiàn)骨支架降解，支架材料周圍覆蓋疏松的纖維組織，水腫較明顯，囊壁形成Ⅲ

8、級(jí)。包囊組織內(nèi)可見(jiàn)有大量的中性粒細(xì)胞和纖維母細(xì)胞，炎癥細(xì)胞反應(yīng)程度Ⅲ級(jí)。而P/T30及P/T50組骨支架周圍纖維包囊水腫程度較輕，囊壁形成Ⅱ級(jí)，炎癥細(xì)胞反應(yīng)程度Ⅱ級(jí)。骨支架植入后4月，仍未見(jiàn)骨支架降解，支架材料表面纖維包囊較厚，囊壁形成Ⅱ級(jí)，纖維包囊有部分中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞，炎癥細(xì)胞反應(yīng)程度Ⅱ級(jí)，組織水腫消退。而P/T30及P/T50組骨支架囊壁形成Ⅰ級(jí)，炎癥細(xì)胞反應(yīng)程度Ⅰ級(jí)。植入后6月，P/T30及P/T50組骨支架表面可見(jiàn)部分降解

9、，支架局部纖維包囊變薄，由1-2層膠原纖維和少量纖維細(xì)胞組成，囊壁形成0級(jí)，包囊內(nèi)僅見(jiàn)少許的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，炎癥細(xì)胞反應(yīng)程度Ⅰ級(jí)。而P/T10組及P LLA組支架囊壁形成Ⅰ級(jí)，包囊內(nèi)仍可見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，炎癥反應(yīng)程度Ⅰ級(jí)。支架降解的新西蘭大白兔的肝腎組織切片行HE染色未發(fā)現(xiàn)組織反應(yīng)及壞死情況。HE染色及 VG染色可見(jiàn)部分組織在骨支架中爬行生長(zhǎng)。依照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中動(dòng)物體內(nèi)埋植實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)方法，骨支架材料在動(dòng)物體內(nèi)無(wú)反應(yīng)或僅有輕度組織反應(yīng)，說(shuō)明PLLA