一株沃氏嗜膽菌的致病性研究.pdf_第1頁(yè)
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1、沃氏嗜膽菌(Bilophila wadsworthia)是一種硫化氫產(chǎn)生菌,因具有較強(qiáng)的嗜膽鹽特性而得名。它是人體腸道內(nèi)的常見(jiàn)菌之一,并被報(bào)道與闌尾炎及其它局部炎癥相關(guān)。有研究顯示,在MF(milk-derived fat)飲食條件下,小鼠腸道中的B. wadsworthia豐度顯著提高,并可增加遺傳易感小鼠(Il10-/-)患結(jié)腸炎的風(fēng)險(xiǎn)。本實(shí)驗(yàn)室從一名患有成人隱匿性免疫性糖尿病的女性新鮮糞便樣本中分離得到一株 B.wadsworth

2、ia,本文首先通過(guò)小鼠模型探究其致病性及可能的致病機(jī)制。
  實(shí)驗(yàn)室前期工作表明在正常飲食條件下灌胃B. wadsworthia不能成功定植于SPF小鼠,因此在本研究中我們采用每天灌胃一次的方式,保證小鼠腸道內(nèi)的B.wadsworthia活菌數(shù)量,結(jié)果顯示,灌胃 B.wadsworthia8小時(shí)后能在小鼠糞便樣本中檢測(cè)到B.wadsworthia活菌,說(shuō)明B. wadsworthia可以通過(guò)小鼠的消化道存活下來(lái)。連續(xù)7天灌胃B.w

3、adsworthia導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)組(BW組)小鼠的飲食量和飲水量均低于對(duì)照組(NC組),體重出現(xiàn)顯著下降。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)小鼠進(jìn)行解剖,采集并稱(chēng)量肝臟、脾臟、脂肪等組織重量,發(fā)現(xiàn)BW組小鼠的附睪脂肪、腸系膜脂肪和腎周脂肪重量顯著低于NC組,而肝臟、脾臟重量卻顯著高于NC組,即出現(xiàn)肝脾腫大癥狀。兩組小鼠的結(jié)腸長(zhǎng)度及遠(yuǎn)端結(jié)腸HE染色結(jié)果無(wú)明顯差異,說(shuō)明灌胃B. wadsworthia并未引發(fā)小鼠患結(jié)腸炎。通過(guò)ELISA對(duì)小鼠血清中的多項(xiàng)免疫因子進(jìn)行

4、檢測(cè),結(jié)果顯示,BW組小鼠血清中IL-6和SAA含量顯著高于NC組。基于Illumina Miseq測(cè)序平臺(tái)對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)小鼠糞便樣本中的菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)行測(cè)序分析,發(fā)現(xiàn)灌胃B. wadsworthia并未導(dǎo)致小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生顯著變化,說(shuō)明小鼠病理表型的出現(xiàn)可能源于B. wadsworthia自身或其代謝產(chǎn)物。
  我們使用PacBio RSII平臺(tái)對(duì)B.wadsworthia進(jìn)行了全基因組測(cè)序,共拼接得到3個(gè)片段,總長(zhǎng)度為4,348

5、,406 bp,GC含量為59.67%。通過(guò)Prokka注釋?zhuān)驳玫?755個(gè)編碼序列、65個(gè)tRNA基因、1個(gè)tmRNA基因、12個(gè)rRNA基因、16個(gè)非編碼RNA基因和286個(gè)信號(hào)肽基因。通過(guò)與KEGG、VFDB數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì),在B. wadsworthia基因組中發(fā)現(xiàn)了多個(gè)與人類(lèi)疾病相關(guān)的基因和多種毒力因子相關(guān)基因。
  無(wú)菌小鼠是探究特定微生物或微生物群落與宿主關(guān)系的良好模型。本研究對(duì)B. wadsworthia在無(wú)菌小鼠

6、中的定植能力以及食物、細(xì)菌互作等因素對(duì)定植的影響進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示,B.wadsworthia在正常飲食條件下不能定植于小鼠腸道;在高脂飲食條件下定植情況有所改善,糞便中的活菌檢出率明顯提高,但仍不能穩(wěn)定定植于全部小鼠中;在高脂飲食條件下,若聯(lián)合灌胃B. wadsworthia及其伴生菌E. coli,則B. wadsworthia和E.coli均可以穩(wěn)定定植,說(shuō)明E. coli可以幫助B.wadsworthia在無(wú)菌小鼠中定植。為進(jìn)

7、一步研究菌株B. wadsworthia與
  E.coli之間的關(guān)系,我們?cè)诔煞置鞔_的培養(yǎng)基中單獨(dú)或混合接種 B. wadsworthia與E. coli,B. wadsworthia的生長(zhǎng)情況可通過(guò)培養(yǎng)基中硫化亞鐵的生成量指征,即通過(guò)觀(guān)察培養(yǎng)基顏色變化對(duì) B. wadsworthia的生長(zhǎng)情況進(jìn)行評(píng)價(jià),實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 E.coli的代謝產(chǎn)物可促進(jìn) B.wadsworthia的生長(zhǎng)。
  綜上,本研究發(fā)現(xiàn),B.wadswor

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