1、目的：通過檢測動脈粥樣硬化患者血漿、斑塊組織以及泡沫細胞中miR-155的相對表達水平，探討miR-155參與動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的分子機制。
　　方法：1.應用PMA刺激THP-1分化形成巨噬細胞，隨后用ox-LDL處理，建立動脈粥樣硬化泡沫細胞模型，應用實時熒光定量PCR技術（qRT-PCR）檢測泡沫細胞中與心血管疾病密切相關的7個miRNA的表達水平，篩選出升高最明顯的 miRNA；2.收集 AS患者和正常對照血漿標本，利用

2、qRT-PCR技術檢測miR-155的相對表達水平；并收集AS患者組織斑塊和正常血管組織，檢測兩組標本中 miR-155的相對表達差異；3.應用 PMA刺激THP-1分化形成巨噬細胞后，用不同濃度ox-LDL處理不同時間，觀察 miR-155的表達量隨泡沫細胞沉積脂質的量和時間變化而變化的趨勢4.應用脂質體轉染技術將miR-155的mimic或inhibitor轉染泡沫細胞，應用ELISA技術檢測炎癥因子TNF-α的含量，并用油紅O染色

3、技術檢測泡沫細胞沉積脂質能力；5.用bioinformatics軟件Miranda、PicTar、TargetScan等預測miR-155的靶基因，并用雙luciferase reporter assay技術驗證miR-155直接靶向CARHSP1；6.利用siRNA基因干擾技術或過表達質粒轉染技術將CARHSP1 siRNA或CARHSP1過表達質粒轉染到泡沫細胞并檢測 CARHSP1經敲低或過表達后炎癥因子 TNF-α的含量和泡沫細

4、胞吞脂能力；7.利用western blot技術檢測miR-155 mimic或inhibitor轉染后，泡沫細胞中miR-155的靶基因CARHSP1及下游炎癥因子表達情況。8.應用TRANSFAC數據庫結果預測能與miR-155啟動子結合的轉錄因子及其結合位點，應用ChIP方法和報告基因技術和熒光素酶報告基因技術驗證轉錄因子NF-κB可以轉錄調控miR-155的表達。
　　結果：1.miR-155在泡沫細胞模型中升高是最明顯的

5、；2.miR-155在AS患者血漿中的相對表達量明顯高于正常對照；miR-155在AS斑塊組織中的表達量也明顯高于正常血管組織；3.miR-155在泡沫細胞中的表達量隨泡沫細胞攝食脂質的量增多而升高，同時也隨泡沫細胞吞脂時間的延長而升高；4.miR-155能降低炎癥因子TNF-α的含量并且減弱泡沫細胞沉積脂質的能力；5.Bioinformatics軟件預測結果表明CARHSP1是miR-155的靶向基因之一，報告基因技術驗證miR-15

6、5直接靶向作用CARHSP13’UTR；6.CARHSP1被抑制表達后能明顯的抑制炎癥因子 TNF-α釋放，而CARHSP1過表達能促進炎癥因子 TNF-α釋放，其中的機制主要是CARHSP1能促進TNF-α mRNA的穩(wěn)定性；7.在泡沫細胞中，miR-155通過直接靶向作用于 CARHSP1從而間接抑制炎癥因子 TNF-α的表達來減緩動脈粥樣硬化炎癥反應，進一步削弱泡沫細胞吞脂能力；8.由炎癥因子TNF-α等刺激活化的轉錄因子NF-κ