1、研究背景及目的：VEGF-A是VEGF家族成員中最具有特征性的，其在組織和細胞中的含量最多，且功能最強。VEGF-A分為5種亞型，其中VEGF165是最為代表性、最為重要的同分異構體。VEGF165主要調(diào)控其受體VEGFR2的表達，從而改善心肌纖維的重構，AMI后VEGF通過結合VEGFR2來發(fā)揮其主要生物學作用。VEGF-A已被證實具有抗凋亡的作用，能維持新生血管及新生心肌細胞的穩(wěn)定性。
　　VEGF與VEGFR2結合后激活磷脂

2、酶C(phospholipase C,PLC)，進而導致三磷酸肌醇(inositol1,4,5-triphosphate,IP3)的形成，IP3引發(fā)細胞內(nèi)Ca2+濃度升高。心肌細胞SERCA可將Ca2+泵回肌質(zhì)網(wǎng)內(nèi)，調(diào)節(jié)細胞內(nèi)游離Ca2+的濃度，調(diào)節(jié)心肌細胞的舒縮性。SERCA的活性受胞質(zhì)內(nèi)游離Ca2+濃度調(diào)節(jié)，Ca2+濃度增加，SERCA的活性隨之增加。其與貯存蛋白結合并儲存，是一種自身調(diào)節(jié)機制。因此，我們猜測VEGF與SERCA之間

3、存在某種必然的聯(lián)系，其作用橋梁很可能同Ca2+相關。為驗證這一猜想，我們研究了VEGF對SERCA活性的影響及其作用機制。
　　研究方法：
　　首先培養(yǎng)293細胞，將重組腺病毒轉(zhuǎn)染該細胞后擴增純化，用綠色熒光蛋白標記法測定腺病毒滴度。
　　將6周齡ICR小鼠隨機分為sham組，Ad-VEGF組，Ad-GFP組，SU5416組，然后對后三組采取結扎心臟冠狀動脈前降支法制備小鼠心肌梗死模型并分別心肌注射Ad-VEGF，Ad

4、-GFP，SU5416（VEGFR2阻斷劑），sham組除為結扎前降支外，余處理與另外三組相同：
　　1.通過心電圖檢測模型構建是否成功。
　　2.分別于術后7天、14天檢測小鼠超聲心動圖以了解各組小鼠的心功能是否有區(qū)別。
　　3.麻醉取心臟后，取其右后肢脛骨裸骨后測其長度。
　　4.ELISA法檢測血清Tn-I水平。
　　5.比色法測SERCA活性。
　　6.利用蛋白免疫印記法（Western bl

5、ot）檢測VEGF，PLN，P-T17PLN，P-S16PLN，SERCA，HAX-1在各組心肌組織中的表達。
　　7.HE染色檢測心肌纖維化情況。
　　8.馬松三色染色（Masson）測心梗面積。
　　9.Tunnel法測心臟組織凋亡。
　　結果：
　　1.心梗術后小鼠各導聯(lián)ST段（ST segment）弓背向上抬高。
　　2.小鼠心梗后心功能降低，VEGF能夠提高心梗后心功能，阻斷VEGF受體后心

6、功能降低。
　　3.心梗術后，心肌受損，注射了Ad-VEGF的小鼠能在短期內(nèi)使梗死邊緣區(qū)心肌更好的再生，有助于提升心功能，降低心衰發(fā)生率，改善預后。
　　4.Tn-I檢測驗證了心梗造模的成功，并且VEGF可以降低Tn-I水平，使其更早的降至正常，而阻斷VEGF受體后，Tn-I水平升高。
　　5.VEGF提高心梗后肌漿網(wǎng)鈣泵活性，阻斷VEGF受體后，活性降低。
　　6.由蛋白免疫印跡實驗結果可知，心梗后心肌梗死邊緣

7、區(qū)VEGF表達增加，轉(zhuǎn)染VEGF的小鼠，VEGF表達量增加更明顯，比其他心梗組多1倍，Ad-VEGF轉(zhuǎn)染心肌細胞成功。VEGF降低PLN與SERCA2a蛋白表達量的比值，升高P-T17PLN與PLN的比值，升高P-S16PLN與PLN的比值。VEGF與HAX-1蛋白的表達量增加有相關性。
　　7.心臟病理切片HE染色說明VEGF組心梗面積（myocardium infarct size MIS）小于其他心梗組。
　　8.心臟