1、目的:腦卒中是導致人類致殘和致死的主要病因之一，其中以急性腦梗死最為常見。腦水腫是導致急性腦梗死后機體死亡的首因。大量血管內物質透過破壞的血腦屏障涌入腦實質，腦容量的急速膨脹導致了機體的死亡。氧化應激損傷血腦屏障，形成血管源性水腫的病理機制已被充分證明。急性腦梗死發(fā)生后，腦組織內積累大量的活性氧自由基，不僅直接攻擊血腦屏障膜結構，還觸發(fā)由細胞膜上的離子通道失活的相關級聯反應，導致血管的通透性增加，加重腦水腫。減輕腦水腫的治療策略有利于降

2、低急性腦梗死的死亡率和致殘率。因此，開發(fā)保護血腦屏障的藥物有望成為急性腦梗死的有效策略。我們前期研究發(fā)現，抗氧化藥物白藜蘆醇、雙環(huán)醇和丹皮酚等可以改善腦梗死后血腦屏障的通透性。注射用丹參多酚酸(salvianolic acids，SAs)是從傳統(tǒng)中藥丹參中提取的多種丹酚酸的水溶性混合物，具有對抗心肌缺血損傷的作用，廣泛應用于治療心肌缺血性疾病。其主要由丹酚酸B(salvianolic acid B，SAB)、丹酚酸D、丹酚酸E、迷迭香酸

3、、紫草酸組成，各單體表現出以較強抗氧化作用為特點的多方面藥理作用。其中SAB已在動物實驗中證實有明確的腦保護作用。本實驗復制小鼠永久性大腦中動脈栓塞模型(permanent middle cerebr alanery occlusion，pMCAO)，應用SAs及陽性對照SAB進行干預，評價腦梗死后血腦屏障滲透性、神經功能、腦梗死體積、腦水腫，旨在證實其腦保護作用并探討其可能機制。
　　方法:采用成年健康雄性CD-1小鼠，應用改良

4、的Longa線栓法制作小鼠pMCAO模型。實驗一探究SAs的血腦屏障保護作用。72只小鼠隨機分為四組（每組18只）:Sham組，pMACO組，SAs組(pMACO+SAs15mg/kg)，SAB組(pMACO+SAB10mg/kg)。藥物干預組在大腦中動脈栓塞后即刻給予藥物腹腔注射，相應的pMCAO組與Sham組給予等體積的生理鹽水。其中每組6只于藥物干預后即刻給予尾靜脈注射2％伊文斯蘭溶液(4ml/kg)，24小時后心臟灌注生理鹽水，

5、留取腦組織進行伊文斯蘭滲透量測定。每組其余12只于術后24小時進行腦保護作用檢測:包括神經功能評分，腦水含量測定以及TTC染色法測定梗死體積。實驗二進行SAs血腦屏障保護機制的探索。每組6只同時進行SOD活性和MDA含量檢測，評定SAs抗氧化能力。每組3只蛋白免疫印跡法測定claudin-5，occludin，MMP-9和AQP-4蛋白表達量。
　　結果:
　　1注射用丹參多酚酸能改善神經功能缺損。
　　術后24小時對

6、Sham組、pMCAO組、SAs組、SAB組小鼠進行神經功能評分，用Mann-Whitney U檢驗做統(tǒng)計分析。除Sham組外梗死各組小鼠均出現評分各異的左側肢體偏癱，神經功能評分明顯升高。藥物干預的SAs和SAB兩組神經功能評分明顯低于pMCAO組，且具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。SAs和SAB兩組比較神經功能缺損無明顯差別。提示SAs能改善急性局灶性腦梗死小鼠的神經功能缺失，其效果與SAB相當。
　　2注射用丹參多酚酸能減輕

7、腦水腫。
　　Sham組梗死側腦組織水含量為79.67％±1.89％。pMCAO組小鼠梗死側腦組織含水量明顯升高至84.42％±2.87％(P＜0.05)。給予藥物干預后，SAs組和SAB組梗死側腦組織含水量降至82.49％±2.89％，81.81％±1.68％，與pMCAO組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。SAs和SAB兩組比較梗死側腦組織水含量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。提示SAs能減少急性局灶性腦梗死小鼠腦水含

8、量，其效果與SAB相當。
　　3注射用丹參多酚酸能降低腦梗死體積。
　　在pMCAO組出現蒼白色梗死區(qū)域。與pMCAO組相比，SAs組和SAB組病變側梗死體積明顯減小，且差異有統(tǒng)計學意義(pMCAO vs.SAs，SAB:54.67％±3.14％ vs.42.88％±2.75％,37.88％±1.29％, P＜0.05)，而SAs組和SAB組患側梗死體積差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。提示SAs能降低急性局灶性腦梗死小鼠腦

9、梗死體積，其效果與SAB相當。
　　4注射用丹參多酚酸能改善血腦屏障的通透性。
　　在pMCAO術后24 h，通過測量腦中伊文斯蘭的漏出量，來評價血腦屏障的通透性。藍色區(qū)域表示伊文斯蘭漏出，指示血腦屏障通透性增加。pMCAO組病變側腦組織血腦屏障通透性明顯增加(P＜0.05 vs.Sham組)。SAs組和SAB組病變側腦組織伊文斯蘭透過量均明顯低于pMCAO(P＜0.05)。SAs組和SAB組比較，差異無統(tǒng)計學意義。提示SA

10、s能降低急性局灶性腦梗死小鼠血腦屏障通透性，其效果與SAB相當。
　　5注射用丹參多酚酸能增加機體抗氧化能力。
　　本實驗中與Sham組相比，pMCAO組24 h后小鼠梗死側腦組織勻漿中總SOD和CU-Zn SOD的活性均明顯下降，而SAs組與SAB組可明顯提高兩種SOD活性，減低MDA的含量，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。而SAs組與SAB組之間并無明顯差異，說明SAs可以清除急性局灶性腦梗死后自由基的腦損傷，提高機體

11、抗氧化損傷的能力，從而發(fā)揮腦保護作用，其保護作用與SAB相當。
　　6注射用丹參多酚酸對claudin-5，occludin，MMP-9，AQP-4蛋白表達量的影響。
　　Western blot檢測結果顯示:腦梗死后24小時claudin-5和occludin蛋白表達降低，而MMP-9和AQP-4蛋白表達升高。藥物干預后claudin-5和occludin蛋白表達升高，MMP-9和AQP-4蛋白表達降低，SAs組與pMCA

12、O組相比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。而SAs組與SAB組，差異無統(tǒng)計學意義。
　　結論:我們研究發(fā)現，注射用丹參多酚酸具有腦保護作用，能降低腦梗死小鼠神經功能缺損，減輕腦水腫，減小腦梗死體積。進一步研究發(fā)現，注射用丹參多酚酸能夠減輕梗死后血腦屏障的通透性，下調腦組織MMP-9和AQP-4的表達量，上調claudin-5和occludin表達量，同時提高SOD活性并降低MDA含量。保護作用與陽性對照物SAB相當。我們推斷，注射