1、格列本脲，自1969年起作為一種降糖藥用于Ⅱ型糖尿病的治療，作用機(jī)制為促進(jìn)胰島素的釋放從而降血糖。近年來(lái)，低劑量格列本脲在各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中展示出多樣的腦保護(hù)作用，這引起了研究者們極大的興趣。格列本脲被證實(shí)在缺血性卒中、創(chuàng)傷性腦損傷、脊髓損傷等多種疾病的動(dòng)物模型中有神經(jīng)保護(hù)作用。此外，回顧性研究也顯示，格列本脲可以減輕缺血性卒中后的腦水腫。
　　國(guó)外針對(duì)格列本脲腦保護(hù)作用的研究，在大鼠使用腹腔注射的給藥方式，在臨床試驗(yàn)中使用靜脈持

2、續(xù)泵注的給藥方式[1，2]。而格列本脲在我國(guó)作為一種口服降糖藥，具有價(jià)格低廉，口服吸收好等明顯的優(yōu)勢(shì)。國(guó)外研究所使用的靜脈注射劑型的格列本脲（RP-1127，Remedy Pharmaceuticals）有很好的安全性且很可能有臨床治療價(jià)值，但該劑型從臨床試驗(yàn)到上市必然仍要經(jīng)過(guò)漫長(zhǎng)的時(shí)間。相比之下，口服制劑的格列本脲已經(jīng)作為一種相對(duì)廉價(jià)的降糖藥物在臨床上有數(shù)十年的使用歷史，其安全性已經(jīng)得到了廣泛的證實(shí)。值得注意的是，相比于用于2型糖尿病

3、的降糖治療，格列本脲在神經(jīng)保護(hù)作用方面所需要的劑量更低[2]，因此將具有更好的安全性。
　　既往針對(duì)格列本脲的藥代動(dòng)力學(xué)研究，所使用的劑量均為針對(duì)治療糖尿病，產(chǎn)生降血糖所用的相對(duì)高劑量，而針對(duì)格列本脲的腦保護(hù)作用，文獻(xiàn)中所涉及的劑量均低于格列本脲作為口服降糖藥所需要使用的劑量。低劑量格列本脲的藥代動(dòng)力學(xué)尚未有研究，我們的研究將為下一步臨床試驗(yàn)做好準(zhǔn)備。
　　我們進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)研究:
　　第一章 低劑量格列本脲在大鼠的藥

4、代動(dòng)力學(xué)研究
　　第一節(jié) 低劑量格列本脲口服給藥與腹腔注射給藥在正常大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)對(duì)比研究
　　目的:研究低劑量格列本脲口服給藥與腹腔注射給藥在正常大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特性。
　　方法:20只大鼠隨機(jī)分為口服組和腹腔注射組(n=10)?？诜M大鼠灌胃給予格列本脲混懸液1 mg/kg。腹腔注射組給予格列本脲10μ g/kg。兩組大鼠分別于給藥后5、15、30、60、90、120、150、180、360、720 mi

5、n采血，以LC-MS/MS法測(cè)定格列本脲在大鼠血漿中的濃度，并監(jiān)測(cè)血糖。WinNonlin藥代動(dòng)力學(xué)分析軟件計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　結(jié)果:格列本脲的線性回歸方程y=1.1731x-0.0127。線性范圍1.02～204 ng/mL，相關(guān)系數(shù)R20.9996。所測(cè)定的格列本脲的高、中、低濃度的日內(nèi)、日間精密度的變異系數(shù)(CV)值均小于5％。高、中、低濃度的格列本脲在大鼠血漿中的平均回收率分別為（99.37±7.22）％、（101.

6、63±5.91）％、(95.19±2.44)％?？诜M大鼠血漿中格列本脲的藥時(shí)曲線較腹腔注射組右移，即達(dá)峰時(shí)間延長(zhǎng)，兩組格列本脲峰濃度均在20-25 ng/mL之間。口服給藥1 mg/kg與腹腔注射給藥10μg/kg相比，格列本脲在大鼠體內(nèi)的藥物峰濃度(Cmax)、半衰期(t1/2)、藥時(shí)曲線下面積(AUClast)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。口服給藥組達(dá)峰時(shí)間(Tmax)較腹腔注射給藥組明顯延長(zhǎng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

7、給藥前兩組大鼠基礎(chǔ)血糖水平在6 mmol/L左右，在12h的血糖監(jiān)測(cè)過(guò)程中，口服組大鼠血糖最低至4.9 mmol/L，腹腔注射組大鼠血糖最低至4.7 mmol/L。兩組大鼠均未出現(xiàn)低血糖的情況。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)建立了一種精確簡(jiǎn)便的低劑量格列本脲在大鼠的血藥濃度測(cè)定方法?？诜? mg/kg格列本脲，可以在大鼠體內(nèi)產(chǎn)生與腹腔注射給藥10μg/kg相近的血藥濃度，兩種給藥方式并具有相似的藥時(shí)曲線下面積。低劑量的格列本脲在口服給藥及腹腔

8、注射給藥時(shí)都是安全的，12h監(jiān)測(cè)過(guò)程中并未有低血糖的發(fā)生。
　　第二節(jié) 低劑量格列本脲口服給藥與腹腔注射給藥在MCAO大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)對(duì)比研究
　　目的:研究低劑量格列本脲口服給藥與腹腔注射給藥在MCAO大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)
　　方法:20只SD大鼠隨機(jī)分為兩組，MCAO口服組及MCAO腹腔注射組，n=10。兩組大鼠分別進(jìn)行MCAO模型后股靜脈插管。拔出線栓口立即給予相應(yīng)劑量的格列本脲，MCAO口服組大鼠灌胃給予格

9、列本脲混懸液1mg/kg，MCAO腹腔注射組大鼠給予格列本脲10μg/kg。兩組大鼠分別于給藥后5、15、30、60、90、120、150、180、360、720 min，采血，以LC-MS/MS法測(cè)定格列本脲在大鼠血漿中的濃度，并監(jiān)測(cè)血糖。WinNonlin藥代動(dòng)力學(xué)分析軟件計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　結(jié)果:所測(cè)定的格列本脲的高、中、低濃度的日內(nèi)、日間精密度的變異系數(shù)(CV)值均小于5％。高、中、低濃度的格列本脲在大鼠血漿中的平均

10、回收率分別為（98.66±3.12）％、（103.19±6.72）％、(99.37±5.44)％。MCAO口服組藥時(shí)曲線較MCAO腹腔注射組右移，即達(dá)峰時(shí)間延長(zhǎng)，兩組格列本脲峰濃度均在20-25 ng/mL之間?？诜o藥1 mg/kg與腹腔注射給藥10μg/kg相比，格列本脲在MCAO大鼠體內(nèi)的藥物峰濃度(Cmax)、半衰期(t1/2)、藥時(shí)曲線下面積(AUClast)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。MCAO口服給藥組達(dá)峰時(shí)間(Tmax)

11、較MCAO腹腔注射給藥組明顯延長(zhǎng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與第一節(jié)中口服給藥組大鼠相比，格列本脲在MCAO口服給藥組大鼠體內(nèi)的藥物峰濃度(Cmax)、達(dá)峰時(shí)間(Tmax)、半衰期(t1/2)、藥時(shí)曲線下面積(AUClast)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。與第一節(jié)中腹腔注射組大鼠相比，格列本脲在MCAO腹腔注射組大鼠體內(nèi)的藥物峰濃度(Cmax)、達(dá)峰時(shí)間(Tmax)、半衰期(t1/2)、藥時(shí)曲線下面積(AUCast)無(wú)顯著性差

12、異(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)中兩組大鼠均未出現(xiàn)低血糖的情況。
　　結(jié)論:口服1 mg/kg格列本脲，可以在MCAO大鼠體內(nèi)產(chǎn)生與腹腔注射給藥10μg/kg相近的血藥濃度，兩種給藥方式并具有相似的藥時(shí)曲線下面積。大鼠在2h MCAO模型中，與未造模生理狀態(tài)下相比，低劑量格列本脲口服給藥與腹腔注射給藥均有相似的藥代動(dòng)力學(xué)特性。低劑量的格列本脲在口服給藥及腹腔注射給藥時(shí)都是安全的，監(jiān)測(cè)過(guò)程中并未有低血糖的發(fā)生。
　　第三節(jié) 亞低溫下低

13、劑量格列本脲在大鼠的藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　目的:臨床研究提示低劑量格列本脲在多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中通過(guò)抑制SUR1-TRPM4通道發(fā)揮多效性保護(hù)作用。我們的研究數(shù)據(jù)表明在體內(nèi)及體外格列本脲均增強(qiáng)亞低溫的有效性。但是亞低溫條件下低劑量的格列本脲藥代動(dòng)力學(xué)尚不明確。我們假設(shè)亞低溫條件下低劑量的格列本脲藥物代謝動(dòng)力學(xué)變化源于CYP2C9活性的改變，CYP2C9活性通過(guò)雙氯芬酸作為探針?biāo)幬锶z測(cè)。本研究的目的是評(píng)估老鼠亞低溫狀態(tài)對(duì)低劑量格列本脲

14、藥物代謝動(dòng)力學(xué)的影響并初步闡述其可能的機(jī)制。
　　方法:雄性SD大鼠被隨機(jī)分為常溫組與低溫組。兩組分別注射33ug/kg格列本脲及10 mg/kg雙氯芬酸鈉。在9個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)采集血標(biāo)本。LC-MS/MS檢測(cè)大鼠血漿格列本脲及雙氯芬酸鈉濃度，并通過(guò)WinNonlin軟件計(jì)算二者藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　結(jié)果:亞低溫條件下格列本脲的總體清除率有顯著下降（下降58％;16.00±4.1 t06.72±2.1 mL/min/Kg;p＜0

15、.001）。兩組半衰期改變沒(méi)有顯著差異（亞低溫組2.71±1.7h，正常體溫組1.64±0.34h;p=0.157）。AUClast在亞低溫組（77.8±18 h*ng/ml）較正常體溫組（33.2±11 h*ng/ml）顯著升高(p＜0.001)。血糖水平均高于70mg/dL。雙氯芬酸總體清除率從正常體溫組的10.33±1.53mL/min/Kg下降至亞低溫組的7.20±1.66 mL/min/Kg。(p＜0.01)。
　　結(jié)論

16、:亞低溫改變低劑量格列本脲藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，使格列本脲在大鼠的血漿清除率下降，血藥濃度升高。亞低溫狀態(tài)下CYP2C9的活性降低。
　　第二章 低劑量格列本脲在重癥腦血管病患者的小樣本臨床研究
　　目的:初步驗(yàn)證口服低劑量格列本脲在重癥腦血管病患者的安全性，并測(cè)定格列本脲血藥濃度。
　　資料和方法:前瞻性研究2015年06月至2015年12月因重癥腦血管病入住南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院神經(jīng)危重癥監(jiān)護(hù)病房的患者。納入條件:1）臨床

17、和影像學(xué)診斷為腦梗塞或腦出血;2）年齡為17-75歲;3）起病72小時(shí)內(nèi)入院;4）入院后空腹血糖＞7.0 mmol/L。受試者經(jīng)鼻飼管或口服給藥，首次給藥負(fù)荷劑量1mg，8小時(shí)后追加劑量0.5mg，之后每8小時(shí)追加0.5mg，至首劑72h后停藥。首次給藥后2h、4h、6h、8h、10h、16h、18h、24h、48h、72h測(cè)定格列本脲血藥濃度，血糖，血清胰島素水平。
　　結(jié)果:格列本脲血藥濃度最高達(dá)56 ng/mL，于給藥后4h