1、研究調節(jié)性T細胞（Regulatory T cell，Treg細胞）、輔助性T細胞17(T helper cell17，Th17細胞)的轉錄因子叉頭?翼狀螺旋轉錄因子（Forkhead box protein P3， FoxP3）、孤獨核兒受體γt（Orphan nuclear receptorγt，RORγt）mRNA在慢性HBV感染不同階段患者外周血單個核細胞（Peripheral blood mononuclear cells，

2、PBMC）中的表達水平，分析其與肝功能丙氨酸氨基轉移酶（Alanine aminotransferase，ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（Aspartate amino transferase， AST）、總膽紅素（Total bilirubin，TBIL）、HBsAg、HBeAg、HBV DNA的關系，并探討Treg、Th17細胞在慢性 HBV感染免疫耐受期可能發(fā)揮的作用，以期用外周血指標來判斷免疫耐受狀態(tài)及變化，并指導臨床通過免疫治

3、療打破免疫耐受，對HBV感染進行早期有效治療。
　　方法：
　　收集天津市第二人民醫(yī)院2014年4月至2015年3月門診或住院未經過抗HBV治療的慢性HBV感染者83例，包括免疫耐受期24例，免疫清除期24例，非活動或低（非）復制期35例，應用實時熒光定量聚合酶鏈反應（Real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）技術檢測PBMC中FoxP3mRNA、ROR

4、γtmRNA的Ct值，用2-DDCt方法計算其相對表達量。同時采用全自動生化分析儀檢測受檢者ALT、AST、 TBIL，應用電化學發(fā)光法檢測HBV血清學標志物HBsAg、HBeAg、HBeAb，應用實時定量PCR進行病毒HBV DNA定量。以健康人14例作為對照組，比較FoxP3mRNA、RORγt mRNA在各組中的相對表達量，及其與肝功能、病毒學指標的相關性，探究其在免疫耐受期慢性 HBV感染中的作用機制。另對83例研究對象中進行肝

5、組織活檢病理檢查的慢性HBV感染患者27例進行肝細胞炎癥與纖維化程度分析，分析肝組織炎癥和纖維化程度與FoxP3、RORγt mRNA相對表達量的關系。
　　結果：
　　1.各期HBV感染者及健康對照組之間FoxP3mRNA相對表達量差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。免疫耐受期、免疫清除期及非活動或低（非）復制期患者均高于健康對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），免疫耐受期FoxP3 mRNA相對表達量高于免疫清除期

6、與非活動或低（非）復制期組患者（0.252±0.410vs0.195±0.381，0.206±0.498），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。免疫清除期與非活動或低（非）復制期組患者差異無統(tǒng)計學意義（P=0.737）。
　　2.免疫清除期RORγt mRNA相對表達量高于健康對照組、免疫耐受期組、非活動或低（非）復制期組（0.421±0.877vs0.102±0.485，0.222±0.743，0.230±0.391），差異均有統(tǒng)

7、計學意義（P<0.01）。免疫耐受期、非活動或低（非）復制期組 RORγtmRNA相對表達量均高于健康對照組（0.222±0.743，0.230±0.391vs0.102±0.485），差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），免疫耐受期、非活動或低（非）復制期組兩組間差異無統(tǒng)計學意義（P=0.831）。
　　3. FoxP3mRNA相對表達量與 ALT、AST、TBIL水平均無明顯相關性，與HBV DNA顯著正相關(P<0.05)。R

8、ORγtmRNA相對表達量與ALT、AST均顯著正相關(P<0.01)，與TBIL、HBV DNA水平均無明顯相關性。FoxP3mRNA的相對表達量與RORγt mRNA成顯著正相關（r=0.728,P<0.001）。
　　4.83例研究對象中HBV DNA陽性組FoxP3mRNA相對表達量高于DNA陰性組（0.271±0.341vs0.208±0.669），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。HBV DNA陽性組RORγt mRN

9、A相對表達量高于DNA陰性組（0.409±0.693vs0.362±0.406），差異無統(tǒng)計學意義。
　　5.83例慢性HBV感染患者中HBeAg陽性組FoxP3mRNA相對表達量低于HBeAg陰性組（0.165±0.328vs0.232±0.507），差異無統(tǒng)計學意義（P=0.884）。HBeAg陽性組RORγt mRNA的相對表達量高于HBeAg陰性組（0.361±0.823vs0.240±0.398），差異有統(tǒng)計學意義（P<

10、0.05）。
　　6.對83例研究對象中進行肝組織活檢病理檢查的27例患者進行分析，其中包括免疫耐受期患者2例（病理診斷分別為G1S1-2，G1-2S1）患者肝組織輕度炎癥損傷與輕度纖維化；免疫清除期患者14例（病理診斷2例為活動性肝硬化，炎癥分級G1有3例，G≥2級有9例，纖維化程度分期，S1及以下有8例，S≥2有4例）；非活動期患者11例（炎癥程度分級G1有8例，G2有3例，纖維化程度分期S1及S2以下9例，S≥2的2例）。<

11、br>　　7.27例進行肝組織病理檢查的患者中肝臟炎癥程度為 G≥2的患者(14例)PBMC中 FoxP3mRNA的相對表達量高于 G1組（13例）（0.162±0.280vs0.044±0.066），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），G≥2組RORγtmRNA的相對表量高于G1組（0.489±1.135vs0.073±0.062），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；肝臟纖維化程度為S>1的患者（11例）PBMC中RORγtmRNA的相

12、對表達量高于S1組（16例）（0.589±1.273vs0.083±0.076），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），S>1組FoxP3 mRNA的相對表達量與S1組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　結論：
　　1.免疫耐受期 HBV感染者存在 Treg/Th17細胞失衡，監(jiān)測其轉錄因子FoxP3mRNA、RORγtmRNA表達情況，能夠有助于評估機體細胞免疫狀態(tài)，可能為抗病毒治療時機選擇提供參考。
　　2. Tr

13、eg細胞在免疫耐受期占優(yōu)勢，可能為導致免疫耐受機體免疫狀態(tài)的原因之一。Th17細胞在免疫清除期占優(yōu)勢，Th17細胞具有促進炎癥反應作用，利于病毒的清除。
　　3.FoxP3mRNA與HBV DNA載量正相關，抑制免疫反應，HBV DNA高載量復制。RORγtmRNA促進炎癥反應，HBeAg發(fā)生血清學轉換后，炎癥反應恢復正常，RORγtmRNA表達量下降
　　4. RORγtmRNA在肝細胞纖維化進程中可能發(fā)揮著重要的作用，有