1、肝臟是機體內重要的代謝器官，不僅參與蛋白質、脂肪等重要物質代謝，還具有排泄、分泌、解毒等功能。因此，肝功能發(fā)生異常不僅會導致代謝紊亂還會引起其他重要器官的功能受損。肝臟的缺血再灌注損傷(hepatic ischemia reperfusion injury，HIRI)是肝臟外科手術如肝臟移植、肝部分切除等過程中經常遇到的病理生理現(xiàn)象。有研究表明:HIRI的發(fā)生是導致肝功能衰竭，手術失敗，病人愈后較差的重要原因。
　　HIRI的主要

2、損傷機制為缺血再灌注時產生的大量活性氧族(reactiveoxygen species:ROS)對肝臟組織細胞的過氧化損害。ROS主要包括超氧陰離子（O2-·），過氧化氫(H2O2)和羥自由基(OH.)等。ROS的化學性質非常活潑，可以與細胞內和胞膜的重要結構蛋白、功能蛋白發(fā)生過氧化反應，改變細胞膜的結構，影響細胞功能，甚至引起細胞和組織死亡。肺臟是機體內對氧含量非常敏感的臟器之一，當HIRI發(fā)生時，是否會引起遠端臟器肺臟也處于氧化應激

3、狀態(tài)，遭受過氧化損傷？
　　PrxⅥ是近幾年發(fā)現(xiàn)的一類過氧化物酶系Peroxiredoxin(Prx)的家族成員之一。PrxⅥ在哺乳動物肺部尤其是肺泡Ⅱ型上皮細胞表達非常豐富。研究表明:PrxⅥ具有谷胱甘肽過氧化物酶的生物活性，其功能主要是負責還原H2O2和磷脂過氧化物等。用高濃度氧、百草枯、H2O2等物質處理大鼠肺上皮細胞引起氧化應激反應后，PrxⅥ的mRNA和蛋白水平會明顯增強。當誘導PrxⅥ在肺上皮細胞系過表達時，能明顯增強

4、細胞分解H2O2的能力，抑制細胞過氧化反應的發(fā)生。說明:PrxⅥ在清除ROS，防止肺組織過氧化損傷中可能發(fā)揮重要作用。當肝臟缺血再灌注損傷發(fā)生后，PrxⅥ的表達水平如何改變？未見報道。
　　本研究通過無損傷血管夾夾閉通往大鼠肝左葉、肝中葉的血管和膽管蒂30 min后松開血管夾，制造大鼠70％肝臟缺血再灌注損傷模型，然后觀察大鼠肺內MDA水平，PrxⅥ的mRNA和蛋白表達水平。探討肝臟缺血再灌注損傷后肺內的氧化應激狀態(tài)以及PrxⅥ的

5、抗氧化作用
　　目的:觀察大鼠肝臟缺血再灌注損傷模型肺內的氧化應激水平以及PrxⅥ mRNA和蛋白表達水平的改變，探討其在肺內氧化應激反應中發(fā)揮的作用。
　　方法:
　　1、肝臟缺血再灌注損傷模型的制備及取材
　　選用健康雄性Wistar大鼠，體重200±10g，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供。隨機分為對照組(Con)和缺血再灌注損傷組(HIRI)，用6％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠(0.5ml/kg)，參照Kohl

6、i等人的方法，分離肝血管和膽管蒂，以無創(chuàng)傷性血管夾夾閉通往肝左葉、肝中葉的血管和膽管蒂。30分鐘后去掉血管夾，恢復肝臟血液供應，制造70％肝實質的肝臟缺血再灌注損傷模型。對照組大鼠只分離血管和膽管蒂并不夾閉。6小時后收集血液，用于ALT（丙氨酸氨基轉移酶）測定;處死大鼠取肝臟和肺，肝臟于4％多聚甲醛中固定進行HE染色，觀察肝組織的形態(tài)學改變，肺組織置于液氮中用于PrxⅥ mRNA水平、蛋白水平測定以及MDA含量測定。
　　2、測定

7、指標及方法
　　2.1 HE染色觀察大鼠肝臟形態(tài)結構
　　肝組織經常規(guī)脫水、透明，石蠟包埋后，切片厚約5μm，蘇木精伊紅染色，日本產Olympus光學顯微鏡下觀察肝組織形態(tài)變化并進行圖象分析。
　　2.2血清ALT水平測定
　　未抗凝血經3000rpm離心10min分離血清，血清ALT水平由全自動生化分析儀測定。
　　2.3肺勻漿的制備和MDA含量測定
　　從-70℃冰箱中取出肺組織，按照10mg/1

8、00μ l加入預冷的勻漿緩沖液(50mmol/L磷酸鉀緩沖液，PH7.4，1mmol/L鹽酸苯甲脒，1mmol/L PMSF，0.1％Tween-20,0.5mol/L NaCl,1mmol/L EDTANa3,5mmol/Lβ-巰基乙醇），冰浴中勻漿，勻漿液4000rpm4℃離心20min，取上清即制成10％肺組織勻漿，肺組織勻漿內MDA含量經南京建成丙二醛(MDA)測定試劑盒測定
　　2.4大鼠肺組織PrxⅥ mRNA水平測定

9、
　　用TRIzol法提取肺內總RNA。約3μg總RNA反轉錄成cDNA。以GAPDH為內對照，進行RT-PCR。分別以PrxⅥ的擴增產物與GAPDH灰度值之比表示目的基因的相對表達量
　　2.5大鼠肺組織內PrxⅥ蛋白水平測定
　　采用Western blot法測定大鼠肺內PrxⅥ蛋白水平。將大鼠肺組織制成勻漿，離心后取上清。用改良Lowry法進行蛋白總量測定.電泳的蛋白上樣量為61ug.經過轉膜和封閉處理后，在PV

10、DF膜上加入兔抗PrxⅥ抗體，室溫靜置過夜。再加入辣根過氧化物酶標記抗兔IgG抗體.按發(fā)光試劑操作說明進行顯影，定影，晾干。用凝膠成像系統(tǒng)掃描膠片并分析圖像，以條帶的積分光密度值表示其蛋白含量
　　結果:
　　1、大鼠肝組織的形態(tài)學改變
　　光學顯微鏡下可見Con組大鼠肝細胞排列成條索狀，圍繞中央靜脈成放射狀排列，肝索間肝血竇大小均勻，無明顯擴張充血。而HIRI組大鼠的肝組織淤血嚴重，肝血竇明顯擴張充血，肝細胞受壓萎縮

11、，肝細胞胞漿染色變淺且有空泡出現(xiàn)，部分肝細胞水腫明顯，體積增大，染色變淺。
　　2、血清ALT水平
　　Con組大鼠血清中ALT為20.03±5.23U/L，而HIRI組血清ALT為87.43±9.06 U/L。HIRI組大鼠血清ALT水平明顯高于Con組(P＜0.01)。
　　3、肺勻漿內MDA的含量
　　Con組大鼠肺內MDA的含量為9.81±1.89mmol/g，而HIRI組MDA含量為14.09±2.47

12、 mmol/g。HIRI組大鼠肺內MDA的含量明顯高于Con組（P＜0.01）
　　4、肺組織PrxⅥ mRNA相對表達量
　　采用RT-PCR的方法測定大鼠肺組織內抗氧化酶PrxⅥ mRNA的表達量。計算與內參照的比值得出相對表達量進行結果統(tǒng)計。分析表明:HIRI組大鼠肺組織內的PrxⅥ mRNA水平均明顯高于Con組(P＜0.01)。說明HIRI組大鼠肺組織內PrxⅥ表達升高。
　　5、大鼠肺組織內PrxⅥ的蛋白水