1、第一部分 NT5C2在兒童急性白血病中的表達及臨床意義
　　目的：探討核苷類似物代謝相關基因NT5C2在兒童急性白血病中的表達及其臨床意義。
　　方法：采用實時熒光定量PCR（real-time quantitative PCR）和免疫組織化學方法檢測NT5C2在63例初診、15例完全緩解、7例復發(fā)兒童急性白血病患兒骨髓樣本的mRNA及蛋白水平，16例非增殖性疾病免疫性血小板減少性紫癜患兒作為對照。統(tǒng)計分析 NT5C2在兒童

2、AL各組中的表達差異及其與臨床指標的關系。
　　結果：1.NT5C2 mRNA在初診急性B淋巴白血?。˙-ALL）、急性T淋巴細胞白血?。═-ALL）、急性髓細胞白血?。ˋML）和ITP對照組的表達量分別為[1.16（0.89-2.25）]、[0.96（0.74-1.25）]、[1.66（0.84-3.15）]、[0.88（0.61-1.21）]。其中AML（P<0.01）、B-ALL（P<0.05）的表達水平顯著高于對照組；T-

3、ALL表達水平與對照組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。動態(tài)觀察NT5C2 mRNA在15例AL患兒不同治療階段的表達變化，完全緩解后的NT5C2 mRNA水平低于初診時（P<0.01）。復發(fā)AL的NT5C2 mRNA水平顯著高于緩解組及對照組（P＜0.01）。
　　2.免疫組織化學結果與熒光定量PCR結果具有相同趨勢。
　　3.AML中NT5C2高表達與預后不良的染色體異常狀態(tài)（r=0.45, P＜0.05）、高危危險度分

4、層（r=0.43, P＜0.05）呈正相關；在B-ALL（r=0.38, P=0.07）、T-ALL(r=0.39, P＜0.05）中NT5C2高表達與高危危險度分層呈正相關。
　　4.AML患兒在化療過程中，誘導緩解化療D9（33.3％vs0 P＜0.05）和D28(25.0%vs0 P＜0.05）骨髓不緩解在高表達組所占比例高于低表達組；微小殘留?。∕RD）陽性率（36.4%vs14.3%P＞0.05）和復發(fā)率(38.5%vs

5、28.6%P＞0.05）在高表達組高于低表達組，但無顯著性差異。
　　結論：1.NT5C2在急性白血病初診和復發(fā)時高表達，完全緩解后顯著降低，提示NT5C2可能在腫瘤細胞中高表達。
　　2.初診時NT5C2高表達與急性白血病的部分危險因素呈正相關，并且與AML治療反應差相關。
　　3.NT5C2可能參與核苷類似物耐藥，有望成為指導個體化化療、判斷預后、監(jiān)測復發(fā)的新指標。
　　第二部分 NT5C2參與白血病化療耐藥

6、機制的初步研究
　　目的:探討 NT5C2基因是否通過參與核苷類似物代謝而發(fā)揮耐藥作用，該基因表達下調能否提高白血病細胞Jurkat的化療敏感性。
　　方法:遞增濃度化療藥作用于Jurkat細胞，熒光定量PCR和Western Blot分別檢測 NT5C2 mRNA和蛋白表達水平的變化趨勢；NT5C2-siRNA重組慢病毒轉染Jurkat細胞使NT5C2表達下調，化療藥干預后流式細胞術檢測細胞凋亡率；在化療藥作用下，CCK-

7、8法檢測NT5C2表達水平不同的Jurkat細胞的增殖活力。
　　結果:1.遞增濃度化療藥作用于Jurkat細胞24h后，隨著核苷類似物化療藥araC、6-MP濃度的升高，NT5C2所表達mRNA和蛋白水平均逐漸升高（P均<0.05）。
　　2.在araC、6-MP分別作用24h后，NT5C2表達下調的Jurkat細胞凋亡率增加(P均<0.05)。
　　3.在遞增濃度araC、6-MP分別作用下，NT5C2表達下調的J