1、研究背景:
　　動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)的產(chǎn)生及發(fā)展機(jī)制多種多樣，其中，脂代謝紊亂是AS產(chǎn)生及進(jìn)一步發(fā)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。脂代謝紊亂可通過(guò)損傷血管內(nèi)皮、引發(fā)慢性炎癥反應(yīng)、促使單核/巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等的增殖遷移、促使多種炎癥因子釋放等等在AS產(chǎn)生及發(fā)展中發(fā)揮極其重要的作用。脂代謝紊亂時(shí)，經(jīng)化學(xué)修飾的低密度脂蛋白（low-density lipoprotein，LDL）形成氧化低密度脂蛋白(oxidi

2、zed low-densitylipoprotein，ox-LDL)是引起AS病理改變的主要因素。血管平滑肌細(xì)胞(vascular smoothmuscle cells，VSMC)作為血管的重要構(gòu)成部分，其異常增殖和遷移可導(dǎo)致血管內(nèi)膜增厚，這在AS產(chǎn)生及進(jìn)一步發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。ox-LDL作為重要的致AS因素，可通過(guò)多種途徑誘導(dǎo)VSMC的增殖，阻斷這些通路可抑制VSMC的增殖從而減緩AS的進(jìn)一步發(fā)展。
　　G蛋白偶聯(lián)受體激酶(

3、G protein coupled receptor kinase，GRK)屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶家族，可通過(guò)調(diào)節(jié)膜蛋白受體而發(fā)揮多種生物學(xué)作用。目前已知存在GRK1-7等七個(gè)亞型。GRK1和GRK7特異性表達(dá)于視網(wǎng)膜上，GRK2、GRK3、GRK5和GRK6在機(jī)體各組織中普遍存在，GRK4局限性存于腎臟、腦、子宮肌層和睪丸等少數(shù)組織中，在我們以往研究中發(fā)現(xiàn)GRK4亦局限性的表達(dá)在VSMC上，且與VSMC的功能調(diào)節(jié)有關(guān)。c-Myc的激活

4、可上調(diào)GRK4的表達(dá)，GRK4與MAPK/ERK信號(hào)通路的激活有關(guān)。以往對(duì)GRK4的研究多集中于其可通過(guò)對(duì)血管緊張素Ⅱ受體、多巴胺受體等膜蛋白受體進(jìn)行調(diào)節(jié)而發(fā)揮在血壓調(diào)節(jié)中的作用;GRK4作為局限性表達(dá)在VSMC上的物質(zhì)，而VSMC的增殖亦是AS形成中的必要環(huán)節(jié)，GRK4是否可參與VSMC增殖的過(guò)程中去，從而在AS的形成及發(fā)展過(guò)程發(fā)揮的作用，目前尚未缺乏研究。
　　因此，在本研究中，我們首先觀察GRK4與AS的關(guān)系，研究其是否參與

5、ox-LDL所誘導(dǎo)的VSMC的增殖的過(guò)程及在其中的作用，并對(duì)GRK4參與其中的作用機(jī)制做初步的探討。
　　研究方法:
　　1.GRK4與AS的關(guān)系研究
　　選取C57BL/6J小鼠與ApoE基因敲除的小鼠（ApoE-/-小鼠），分為普通飲食組和高脂飲食組，油紅O染色觀察AS程度，Western Blot觀察相應(yīng)的GRK4表達(dá)差異;大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷模型建立，分為普通飲食組和高脂飲食組，組織HE染色觀察血管內(nèi)膜厚度差異，

6、Western Blot觀察相應(yīng)的GRK4表達(dá)差異。
　　2.GRK4與VSMC增殖的關(guān)系研究
　　采用CCK8及細(xì)胞計(jì)數(shù)法觀察ox-LDL對(duì)A10細(xì)胞增殖作用的影響;GRK4 siRNA干擾A10細(xì)胞GRK4表達(dá)后，觀察ox-LDL誘導(dǎo)的A10細(xì)胞增殖作用的改變。
　　3.GRK4表達(dá)升高的機(jī)制及促進(jìn)VSMC增殖的機(jī)制研究
　　采用Western blot方法研究ox-LDL促進(jìn)GRK4表達(dá)增高的機(jī)制，初步探討

7、GRK4對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的VSMC增殖作用的信號(hào)通路。
　　研究結(jié)果:
　　1.飼喂高脂可誘發(fā)ApoE-/-小鼠AS斑塊的形成;SD大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后頸動(dòng)脈內(nèi)膜增厚、VSMC增殖。
　　2.飼喂高脂后，ApoE-/-小鼠胸主動(dòng)脈組織上GRK4表達(dá)增加;與正常SD大鼠比較，頸動(dòng)脈球囊損傷后SD大鼠頸動(dòng)脈組織上GRK4表達(dá)增加。
　　3.以ox-LDL刺激A10細(xì)胞，細(xì)胞增殖明顯，且GRK4表達(dá)增加;干擾GRK4

8、的表達(dá)后，在ox-LDL刺激下，A10細(xì)胞的增殖減弱。
　　4.c-Myc抑制劑10074-G5可有效阻斷ox-LDL刺激的細(xì)胞GRK4表達(dá)增高;在MAPK/ERK抑制劑PD98059作用下，ox-LDL對(duì)VSMC增殖的作用受抑制;運(yùn)用GRK4siRNA干擾A10細(xì)胞GRK4表達(dá)后，ox-LDL刺激A10細(xì)胞所引起的MAPK/ERK通路激活被抑制。
　　結(jié)論:
　　1.GRK4在ox-LDL促進(jìn)的VSMC增殖中起重要作