1、目的：
　　本研究擬比較洋橄欖素對肺癌(A549)、乳腺癌（MCF-7、MDA-231）及肝癌(HepG-2)等不同腫瘤細胞的敏感性，研究洋橄欖素對乳腺癌MCF-7細胞周期及凋亡的影響，闡明洋橄欖素對乳腺癌細胞周期及凋亡下游信號轉導蛋白靶向調(diào)控，分析探討洋橄欖素抗乳腺癌的信號轉導分子機制，為尋找乳腺癌藥物治療的切入點和治療靶點提供理論與實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1、采用MTT比色法檢測洋橄欖素對不同腫瘤細胞的增殖抑制

2、作用;
　　2、采用流式細胞儀觀察洋橄欖素處理乳腺癌(MCF-7)細胞24h后，對其周期及凋亡變化的影響;
　　3、采用Western blot法檢測洋橄欖素對周期調(diào)控蛋白CDK1、CyclinB1和細胞凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2表達水平的影響;
　　4、進一步采用Western blot法檢測洋橄欖素對MAPK及PI3K/AKt信號通路相關蛋白表達的影響，初步闡明其抗乳腺癌MCF-7細胞的信號通路作用機制;

3、>　　5、相關信號轉導通路抑制劑處理MCF-7細胞，采用流式細胞儀檢測MCF-7細胞凋亡變化情況，進一步明確洋橄欖素抗乳腺癌MCF-7細胞作用機制。
　　結果：
　　1、不同濃度(0.25，0.5，0.75，1，1.5μM)的洋橄欖素處理不同的腫瘤細胞:肺癌(A549)、乳腺癌(MCF-7、MDA-231)及肝癌（HepG-2），24h MTT檢測結果顯示:洋橄欖素對MCF-7細胞的增殖抑制作用最明顯，且具有時間和劑量的依賴

4、性，因此我們選取了MCF-7細胞為本課題的研究對象。洋橄欖素處理MCF-7細胞24，48，72h的IC50分別是0.81，0.68，0.61μM。
　　2、通過流式細胞儀測定的細胞周期結果顯示:與對照相比，洋橄欖素(0.75μM、1μM)處理MCF-7細胞后，細胞G0/G1期細胞含量基本不變，S期細胞含量逐漸減少，G2/M期細胞含量明顯增多，呈劑量依賴性。當洋橄欖素為1μM濃度時，G2/M期細胞含量是24.6±8.9％，而對照組細

5、胞含量數(shù)是8.5±2.3％;當洋橄欖素為1μM濃度時，G0/G1期細胞含量是60.1±7.6％，而對照組細胞含量數(shù)是63.5±5.0％。細胞凋亡實驗結果顯示:與對照組相比洋橄欖素作用后，MCF-7細胞凋亡率明顯增加，且呈劑量依賴性。當洋橄欖素濃度為0.75μM、1μM時，MCF-7細胞凋亡率分別為31.9±5.2％，41.1±4.6％。流式數(shù)據(jù)顯示:洋橄欖素具有阻滯MCF-7細胞于G2/M期及誘導其凋亡的作用。
　　3、Weste

6、rn blot檢測結果表明:洋橄欖素作用MCF-7細胞24h后，下調(diào)G2/M期相關蛋白CDK1、CyclinB1的表達;上調(diào)促細胞凋亡蛋白Bax表達，下調(diào)抗細胞凋亡蛋白Bcl-2的表達，且與上述流式結果相符。
　　4、進一步用Western blot法檢測MAPK、PI3K/AKt信號通路相關蛋白表達的結果表明:洋橄欖素下調(diào)p-ERK的表達，上調(diào)p-p38的表達，而不影響p-JNK的表達水平;另外，洋橄欖素也可抑制PI3K/AKt

7、信號通路中p-AKt的表達。
　　5、與單獨用0.75μM洋橄欖素組對比，加入PI3K/AKt及MAPK信號通路相關蛋白的抑制劑預處理組測細胞凋亡變化情況表明:與0.75μM洋橄欖素組（18.7±3.5％）相比，ERK抑制劑(U0126)+洋橄欖素組細胞凋亡率增加（34.0±5.1％），p38抑制劑(SB203580)+洋橄欖組細胞凋亡率減少（12.6±3.0％），JNK抑制劑(SP600125)+洋橄欖素組細胞凋亡率基本不變（1

8、7.8±1.7％），AKt抑制劑(LY294002)+洋橄欖素組細胞凋亡率明顯增加（36.4±11.3％）。
　　結論：
　　洋橄欖素能抑制乳腺癌細胞MCF-7的增殖，阻滯MCF-7細胞周期于G2/M期，誘導MCF-7細胞凋亡。其與改變細胞G2/M期相關的蛋白(CDK1、CyclinB1)及細胞凋亡相關的蛋白（Bax、Bcl-2）的表達有關。洋橄欖素介導MAPK及PI3K/AKt信號通路起到抗乳腺癌MCF-7細胞活性的作用。