1、嬰兒痙攣癥(IS)是以年齡依賴性為特征的一種癲癇綜合征，主要臨床特征為點頭樣痙攣發(fā)作，腦電圖呈高峰節(jié)律紊亂，且常伴智力發(fā)育低下，其發(fā)病機制尚不清楚。半個世紀以前發(fā)現(xiàn)用促腎上腺皮質激素(ACTH)治療嬰兒痙攣癥有效，至今仍是IS治療的首選藥物，但其作用機理尚未闡明。已發(fā)現(xiàn)IS患者腦脊液中ACTH和皮質醇都低于正常對照，進一步研究提示ACTH是通過抑制CRH在杏仁核中的表達發(fā)揮其抗癲癇作用。已有較多動物實驗結果顯示CRH具有誘導癲癇作用，增

2、加未成熟腦的興奮性。因此，有學者認為嬰兒痙攣癥是腦內CRH過多引起，但至今仍缺乏對IS患者腦組織的直接研究依據(jù)。
　　CRH在大腦主要有兩個受體CRHR1和CRHR2，CRH對CRHR1的親和性比CRHR2高數(shù)倍，CRHR1是CRH發(fā)揮效應的重要受體。CRHR1和CRHR2屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族，與CRH結合后啟動cAMP及IP3，進一步激活細胞內蛋白激酶PKA和PKC等信號途徑發(fā)揮生物學效應。PKC與癲癇發(fā)作關系密切，激活大鼠海

3、馬神經元PKC的電生理研究發(fā)現(xiàn)PKC與癲癇易感性有著重要的關系，參與癲癇的發(fā)生與維持機制。CRH、CRHR1及其下游信號在人IS致癇組織中的作用尚不清楚，本研究檢測CRH、CRHR1和CRHR2在IS患者致癇組織中的表達，進一步分析下游PKC和PKA信號分子的變化，有助于了解其在嬰兒痙攣癥癲癇性痙攣發(fā)作中的作用。
　　我們選取了難治性嬰兒痙攣癥手術切除標本17例以及6例尸檢對照作比較。利用Real-time PCR技術檢測手術切除

4、標本以及尸檢對照中CRH、CRHR1和CRHR2的mRNA的表達情況，并進一步用Western blot和免疫組織化學技術檢測CRH和CRHR1的蛋白表達情況及細胞定位。由于CRH信號通路涉及PKA和PKC，因此我們還研究了CRH信號通路中PKA和PKC在嬰兒痙攣癥致癇組織中的表達。通過上述研究，得到下面的結果:
　　一、CRH、CRHR1和CRHR2在嬰兒痙攣癥致癇組織和對照組織中的表達
　　1.利用Real-time P

5、CR，我們觀察到在mRNA水平，CRH和CRHR1在嬰兒痙攣癥致癇組織中的表達較對照組明顯上調，而CRHR2在嬰兒痙攣癥致癇組織的表達和對照組無明顯差異（結果未出示）。Westem Blot結果顯示在蛋白水平，CRH和CRHR1的表達和Real-time PCR的結果一致，CRH和CRHR1在嬰兒痙攣癥致癇組織中的表達較對照組明顯增高。我們進一步分析CRHR1下游信號分子PKA和PKC，結果PKC在嬰兒痙攣癥致癇組織的表達較對照組明顯升

6、高，而PKA無明顯差異（結果未出示）。
　　2.免疫組化結果分析顯示CRH和CRHR1的免疫陽性反應在嬰兒痙攣癥致癇組織中明顯升高，CRH主要分布于神經元，CRHR1主要分布于神經元，在膠質細胞也有表達。半定量免疫染色評分分析顯示CRH和CRHR1的免疫陽性反應評分明顯高于對照。免疫熒光雙標顯示，CRH陽性神經元共表達NF200，GFAP陽性膠質細胞和HLA陽性小膠質細胞不表達CRH。CRHR1陽性神經元、膠質細胞和小膠質細胞分別