1、目的：胃腺癌（gastric adenocarcinoma，GAC）屬于消化道惡性上皮性腫瘤，目前發(fā)病率仍高居我國男性惡性腫瘤第二位，死亡率為男性惡性腫瘤患者的前三位。DNA聚合酶δ（DNA polymerase delta，POLD）是真核細(xì)胞DNA聚合酶B族中的一員，廣泛參與生物體內(nèi)DNA的復(fù)制及損傷修復(fù)過程，其第三亞基（DNA polymerase delta3，POLD3）作為POLD的輔助亞基，在POLD參與的各項(xiàng)生命活動中均

2、處于核心地位。目前在對POLD3與癌癥的關(guān)系研究中，能夠明確的是POLD3的突變體增加結(jié)直腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)、卵巢癌預(yù)后不良患者中POLD3的表達(dá)下調(diào)，但其與胃癌的關(guān)系暫未見報(bào)道。本課題通過免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）、蛋白印跡（western blotting，WB）、實(shí)時(shí)定量多聚酶鏈反應(yīng)（real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-q PCR

3、）、體外細(xì)胞學(xué)等技術(shù)檢測GAC組織與胃腺癌細(xì)胞系中POLD3的表達(dá)水平，分析了POLD3表達(dá)對GAC增殖、分化及預(yù)后等影響。
　　方法：⑴收集2005年1月至2008年12月期間在右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院的經(jīng)病理確診的、接受了根治性手術(shù)切除的GAC臨床I-II期病例；收集所有研究對象的手術(shù)切除石蠟標(biāo)本和適量新鮮組織用于POLD3表達(dá)分析；同時(shí)，收集所有研究對象的相關(guān)臨床病理資料及生存隨訪資料，隨訪截止日期至2014年12月。⑵使

4、用IHC檢測POLD3蛋白在GAC腫瘤組織及腫瘤旁組織的表達(dá)情況，通過t檢驗(yàn)分析POLD3在腫瘤組織與腫瘤旁組織間的表達(dá)差異；使用卡方檢驗(yàn)、非條件Logistic回歸方法分析腫瘤組織中POLD3表達(dá)與GAC臨床病理特征的關(guān)系；通過Kaplan-Meier法繪制生存曲線并計(jì)算中位生存期（Median survival time，MST），通過多因素風(fēng)險(xiǎn)比例回歸模型計(jì)算POLD3對GAC總體死亡風(fēng)險(xiǎn)值。⑶使用RT-q PCR技術(shù)檢測POLD

5、3 mRNA在10例腫瘤組織與腫瘤旁組織的表達(dá)情況，通過t檢驗(yàn)比較分析POLD3 mRNA在腫瘤組織與腫瘤旁組織間的表達(dá)差異。⑷常規(guī)培養(yǎng)2株人胃腺癌細(xì)胞系及1株人非腫瘤胃黏膜上皮細(xì)胞株，通過WB和RT-q PCR分別檢測各培養(yǎng)細(xì)胞系中POLD3蛋白和mRNA的表達(dá)水平。⑸通過分子克隆技術(shù)檢測分析體外過表達(dá)POLD3對GAC細(xì)胞增殖的影響。
　　結(jié)果：①當(dāng)前研究共收集到符合要求的TNM分期為I-II期的GAC患者共82例，男性和女性

6、分別為58例（70.7％）和24例（29.3%），平均年齡53.17?11.19歲，其中早期胃癌4例（4.9%），進(jìn)展期胃癌78例（95.1%），高分化者或中分化者占65.9%（54/82）、低或未分化者占34.1（28/82）。②與腫瘤旁組織相比，POLD3蛋白在GAC腫瘤組織中表達(dá)水平減少（P=4.26?10-14）；體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)有相似發(fā)現(xiàn)。③與腫瘤旁組織相比，POLD3 mRNA在GAC腫瘤組織中表達(dá)水平減少（P=8.00?10

7、-6）；體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)有相似發(fā)現(xiàn)（P=7.20?10-5）。④與低POLD3表達(dá)者相比，高POLD3表達(dá)者其腫瘤組織分化程度更高，對應(yīng)貢獻(xiàn)值為5.00(1.35?-18.48)，P值為0.016；體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)有相似發(fā)現(xiàn)。⑤POLD3表達(dá)影響胃腺癌腫瘤大小，腫瘤直徑較大者，腫瘤組織中POLD3蛋白表達(dá)水平較低，Logistic回歸分析表明高POLD3表達(dá)者，抑制腫瘤生長的貢獻(xiàn)值為5.78（1.55-21.51），對應(yīng)P值為0.009。⑥

8、POLD3表達(dá)影響體外培養(yǎng)胃腺癌細(xì)胞增殖，與空載或空白對照相比，低POLD3表達(dá)的MKN-45細(xì)胞株在接受了POLD3過表達(dá)載體后，其生長速度明顯受到抑制（P<0.05）。⑦POLD3表達(dá)水平影響胃腺癌患者的預(yù)后：高和低表達(dá)對應(yīng)中位總體生存期分別為34和16個(gè)月（P<0.01），低POLD3表達(dá)者其總體死亡風(fēng)險(xiǎn)為高表達(dá)者2.43倍（可信區(qū)間為1.25-4.71）。
　　結(jié)論：POLD3在GAC腫瘤中表達(dá)下調(diào)，這種下調(diào)與腫瘤分化、增