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文檔簡介
1、目的:探討柴樸湯上調MAL對氣道上皮細胞分泌IL-5、FasL的影響及作用機制
方法:32只健康雄性SD大鼠,體重(250±10)g,隨機分為2組,每組各16只。其中一組再隨機分為兩組,每組8只,即柴樸湯組、正常組,提取柴樸湯含藥血清和正常血清。另一組為哮喘組,以VOA致敏,復制哮喘模型,取哮喘血清。同時取哮喘組及正常組肺組織行HE染色,觀察其炎性浸潤情況。將生長良好的大鼠氣道上皮細胞分組:正常組(A組),哮喘組(B組),預柴
2、樸湯組(C組),U0126組(D組)和柴樸湯組(E組);正常組予以加3mL正常血清,哮喘組予以加2mL哮喘血清和1mL正常血清,預柴樸湯組予以提前2小時加1mL柴樸湯含藥血清后再加2mL哮喘血清,U0126組予以加10μL U0126和2mL哮喘血清和1mL正常血清,柴樸湯組予以加1mL柴樸湯含藥血清和2mL哮喘血清,培養(yǎng)24小時后,提取細胞蛋白、RNA,收集培養(yǎng)液。用半定量RT-PCR檢測氣道上皮細胞中MAL、IL-5、FasL mR
3、NA的表達。用Western blot檢測MAL、FasL、P-ERK1/2蛋白在氣道上皮細胞中的表達。以ELISA檢測上清液中IL-5濃度。
結果:
1、大鼠的一般情況及HE染色的結果
1)一般情況
用卵蛋白致敏激發(fā)后,大鼠精神萎靡,毛發(fā)枯黃,煩躁,易激惹,呼吸困難、深促,腹肌收縮、行動緩慢呆滯等;柴樸湯組及正常組大鼠未出現(xiàn)上訴情況。
2) HE染色
?正常組大鼠:肺泡完整,
4、肺泡間質較清晰,氣道壁及平滑肌無增厚,氣道周圍無炎性細胞浸潤。
?哮喘組大鼠:大部分肺泡破壞、融合,肺泡間隔斷裂,氣道壁及平滑肌明顯增厚,管腔狹窄,周圍炎癥細胞浸潤。
2、檢測FasL、MAL、P-ERK1/2、IL-5蛋白表達結果
MAL、FasL蛋白在哮喘組表達最弱,與柴樸湯組、正常組比較差異有顯著性(p<0.05);MAL蛋白在正常組表達最強;IL-5蛋白在哮喘組的表達上調,與其他組比較差異有統(tǒng)計學意
5、義(p<0.05);U0126組、柴樸湯組的FasL蛋白的表達高于哮喘組,統(tǒng)計學處理有顯著性(p<0.05);P-ERK1/2蛋白在U0126組表達下調,哮喘組上調,兩組比較差異有顯著性(p<0.05);柴樸湯組P-ERK1/2蛋白的表達較弱,與哮喘組比較差異有意義(p<0.05),但仍高于正常組,兩組相比差異有意義性(p<0.05),柴樸湯組P-ERK1/2蛋白的表達高于U0126組,差異有顯著性(p<0.05);U0126組MAL蛋
6、白的表達稍低于柴樸湯組,比較差異無顯著意義(p>0.05);柴樸湯組與預柴樸湯組MAL蛋白的表達相比差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。
3、細胞上清液IL-5的濃度結果
IL-5濃度在哮喘組表達最高,與柴樸湯組及UO126組比較,有統(tǒng)計學意義(p<0.05);柴樸湯組 IL-5濃度高于正常組,兩者比較差異有顯著性(p<0.05),但其濃度低于U0126組,比較差異有意義(p<0.05);而與預柴樸湯組比較差異不顯著(
7、p>0.05)。
4、檢測FasL、MAL、IL-5mRNA的表達
FasL、MALmRNA在哮喘組表達最弱,與柴樸湯組、UO126組及正常組比較差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05);柴樸湯組 MALmRNA的表達與預柴樸湯組、UO126組相比差異無顯著性(p>0.05);柴樸湯組FasLmRNA的表達比U0126組高,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。IL-5mRNA的表達UO126組較柴樸湯組高,兩組比較有統(tǒng)計學意義
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