1、目的:腫瘤抑制基因BLU的表觀遺傳學沉默與多種惡性腫瘤的發(fā)生密切相關，然而，BLU在胃癌中的表達及其生物學功能尚無相關報道。本研究旨在初步探討B(tài)LU基因在胃癌中的表達變化及其甲基化調控機制。
　　方法:（
　　1）用實時定量PCR(qRT-PCR)法檢測52例胃癌組織及對應的癌旁組織、6株胃癌細胞（SGC7901, HGC27, BGC823, MKN45, MGC803,AGS）及胃黏膜正常上皮細胞GES-1中BLU mR

2、NA表達水平,Western blot法檢測7株細胞中BLU蛋白表達水平；
　　（2）采用Promoter Scan program軟件預測BLU核心啟動子區(qū)，并通過雙熒光素酶報告基因實驗進行驗證，采用TFSEARCH和Methyl Primer Express Software v1.0軟件預測BLU核心啟動子區(qū)中可能有轉錄因子結合的功能性CpG位點；
　?。?）重亞硫酸鹽測序PCR（BSP）法分析胃癌細胞和組織中BLU核

3、心啟動子區(qū)CpG位點的甲基化程度，初步分析 DNA甲基化和 BLU基因表達的關系，找出潛在的功能性CpG位點；
　　（4）去甲基化藥物處理AGS和SGC7901細胞，qRT-PCR和Western blot法分析處理后BLU表達變化；
　?。?）siRNA干擾Sp1表達及雙熒光報告基因實驗，分析BLU表達是否受轉錄因子Sp1調控；
　?。?）在AGS和SGC7901細胞中，通過染色質免疫共沉淀（ChIP）方法分析Sp1

4、能否與BLU啟動子區(qū)結合，采用電泳遷移率實驗(EMSA)及雙熒光素酶報告基因實驗分析SGC7901細胞中BLU-39CpG位點甲基化對Sp1結合能力的影響；
　?。?）通過CCK-8實驗及平板克隆形成實驗，研究BLU表達下調對胃癌細胞SGC7901增殖能力及克隆形成能力的影響。
　　結果:
　　（1）6株胃癌細胞中 BLU表達水平均顯著低于胃黏膜正常上皮細胞株GES-1，69.2％(36/52)的胃癌組織中BLU mR

5、NA表達明顯低于對應癌旁組織，且胃癌組織臨床病理特征均與 BLU表達之間無顯著相關性；
　　（2）BLU基因核心啟動子區(qū)位于-181~+63bp，軟件預測出-85CpG和-39CpG是潛在的功能性CpG位點；
　　（3）胃癌細胞和組織中BLU表達水平與其啟動子區(qū)甲基化水平（尤其是-39CpG位點的甲基化）負相關，提示-39CpG是潛在的功能性CpG位點；
　　（4）去甲基化藥物處理AGS和SGC7901細胞后，BLU表

6、達出現不同程度的恢復；
　?。?）BLU轉錄受轉錄因子Sp1的激活；
　?。?）Sp1結合于BLU近端啟動子區(qū)(-43~35bp)，且其結合位點“GC box”中-39CpG位點的甲基化可降低其結合能力，進而阻礙BLU基因的轉錄及表達；（7）通過siRNA干擾BLU的表達之后，SGC7901細胞的增殖能力和平板克隆形成能力顯著提高。
　　結論:
　?。?）BLU基因在胃癌中的失活與其核心啟動子（尤其是-39CpG