1、UGPase(UDP-glucose pyrophosphorylase，尿甘二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶)是植物糖代謝的主要參與酶之一，在植物的生長發(fā)育過程中起著重要作用。 本研究以甘蔗(FN95-1702)為材料，通過RT-PCR，首次克隆得到了甘蔗UGPase基因cDNA片段。該片段長1495 bp，其中包含的ORF為1431 bp，共編碼476個氨基酸。將其與NCBI中其它植物的UGPase基因進行比對，與玉米、大麥、綠竹的相

2、似性分別為94％、88％和88％。另外，采用RACE技術(Rapid Amplification ofcDNA Ends，cDNA末端快速擴增)克隆獲得了甘蔗葉UGPase基因cDNA的5'及3'端序列，其中5'端序列長為91 bp，克隆得到的兩個3'端片段長分別為215 bp及316 bp。同時，提取甘蔗(FN95-1702)葉片的基因組，通過PCR的方法，克隆得到了甘蔗UGPase基因DNA片段。該片段長為2617 bp，序列包含1

3、3個外顯子，其中11個為完整的外顯子，序列還包含了12個內含子。 將甘蔗UGPase基因cDNA片段連接至載體pBI121，成功構建了植物表達載體。并通過農(nóng)桿菌的介導，采用浸花法轉化擬南芥，經(jīng)抗性篩選及鑒定，初步確定獲得了4棵轉基因苗。為進一步對UGPase的相關功能進行研究奠定了基礎。 另外，將甘蔗UGPase基因cDNA片段與原核表達載體pQE-30相連接，經(jīng)鑒定表明，表達載體構建正確，為下一步的原核表達研究作好了前