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文檔簡介
1、目的:為了驗證特立氟胺的抗腫瘤作用,本實驗進行了特立氟胺對肝癌細胞SMMC-7721的增殖、周期、凋亡等細胞功能實驗,并通過基因芯片來分析特立氟胺對lncRNA和mRNA表達譜的影響,從而探討特立氟胺的抗腫瘤作用的機制。
方法:培養(yǎng)肝癌細胞SMMC-7721并實施細胞功能實驗如增殖、周期、凋亡等。為了研究特立氟胺的作用機制,我們采用基因芯片分析lncRNA及mRNA表達譜的影響,并通過GO分析及pathway分析分析與之相關的
2、基因和通路。
結果:
1.特立氟胺影響肝癌細胞的增殖
本實驗采用CCK8法分別測定經(jīng)過特立氟胺處理過的細胞以及正常對照組細胞的增殖情況。結果表明,特立氟胺具有明顯的抑制肝癌細胞增殖作用,而且這種作用呈時間及濃度依賴性。
2.特立氟胺降低肝癌細胞的克隆形成能力
特立氟胺可明顯抑制肝癌細胞的克隆形成能力,這種抑制作用在25uM及50uM濃度時表現(xiàn)明顯,在100uM濃度時表現(xiàn)出完全的抑制作用。
3、
3.特立氟胺可以促進肝癌細胞凋亡
特立氟胺可以明顯促進肝癌細胞凋亡且有明顯的濃度依賴性。特立氟胺藥物作用48小時以后,在濃度梯度為25uM,50uM,100uM、200uM時,所測得的總凋亡百分比分別是9.8%、18.9%、44.2%、90.3%。
4.特立氟胺可以將肝癌細胞周期阻滯在S期
特立氟胺具有明顯的細胞周期阻滯作用,其將細胞周期阻滯在S期,這種作用也具有明顯的濃度依賴性。特立氟胺作用4
4、8小時以后,處于S期細胞所占的比例由4.01%(正常對照)上升的到33.98%(特立氟胺,50uM),57.65%(特立氟胺,100uM)。
5.Microarray Analysis
正常對照組與經(jīng)過特立氟胺作用的實驗組細胞lncRNA、mRNA表達譜明顯不同。對于lncRNA來講,共有2085種lncRNA出現(xiàn)表達差異;其中藥物處理的實驗組細胞相對于正常對照組細胞共有389種上調(diào)的lncRNA和1446種下調(diào)的l
5、ncRNA;對于mRNA來說,經(jīng)過藥物處理的實驗組細胞與正常對照組細胞共計有1561mRNA出現(xiàn)表達差異,其中藥物處理的實驗組細胞相對于正常對照組細胞有389種上調(diào)的mRNA和1172種下調(diào)的mRNA。GO分析和pathway分析結果表明一些基因及通路參與特立氟胺的作用機制中。
結論:
1.特立氟胺可以抑制肝癌細胞的增殖、阻滯細胞周期在S期,并可以促進細胞凋亡。
2.特立氟胺的抗腫瘤作用可能通過影響lncR
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