1、雞白痢沙門氏菌多侵害20日齡以內(nèi)幼雛，引起白色下痢，病死率極高，成年雞則可帶菌而無臨床癥狀。該病既可垂直傳播，又有嚴重的水平傳播，所造成的危害和經(jīng)濟損失巨大。目前，在西方發(fā)達國家該病已經(jīng)被消滅或基本消滅，然而在個別小的禽群中仍有發(fā)生，國內(nèi)禽群雞白痢的爆發(fā)仍較多。尋求雞白痢沙門氏菌的致病基因?qū)τ诹私馄渲虏C理及有效地防治雞白痢具有重要的意義。 隨著微生物基因組序列的大量測定，通過比較基因組差異分析致病微生物的分子致病機制已成為新

2、近微生物基因組研究的一大熱點。抑制性差減雜交方法(suppression subtractive hybridisation，SSH)的問世為微生物基因組學研究、致病基因和新基因的篩選提供了新技術。本研究利用SSH構建了雞白痢沙門氏菌與腸炎沙門氏菌的差減文庫，并對其中的部分序列進行了初步分析。 1．雞白痢沙門氏菌與腸炎沙門氏菌抑制差減雜交文庫的構建應用抑制性差減雜交技術(SSH)對雞白痢沙門氏菌533株與腸炎沙門氏菌50041

3、株進行基因組片段的差異分析，構建了雞白痢沙門氏菌的差減文庫。經(jīng)Dot-blot篩選，并對部分片段測序和同源性分析，結(jié)果表明這些序列主要分為4類：可移動遺傳元件，Ⅲ型分泌系統(tǒng)相關序列，質(zhì)粒轉(zhuǎn)移相關序列，未知功能序列。其中3個差減片段與編碼福氏志賀菌侵入質(zhì)?？乖璉paJ蛋白基因的同源性達50％。本研究中構建的差減文庫為研究雞白痢沙門氏菌特異性致病基因和其致病機理提供了重要的材料。 2．雞白痢沙門氏菌ipaJ基因的克隆與表達雞白痢沙

4、門氏菌與腸炎沙門氏菌差減文庫中的片段PEA2、PE31、PE44與豬霍亂沙門氏菌psfD10 ipaJ相應序列同源性分別達97％、99％和100％。將PEA2、PE31和PE44序列拼接后獲得雞白痢沙門氏菌完整的ipaJ序列，設計一對引物從雞白痢沙門氏菌中克隆出ipaJ基因并將其構建到原核表達載體pET-30a(+)上，誘導表達出37KDa的蛋白。Western-blot試驗顯示雞白痢沙門氏菌陽性血清能與體外表達的蛋白呈現(xiàn)特異性反應。特

5、異性實驗表明ipaJ是雞白痢沙門氏菌特有的基因。對97株不同來源的雞白痢沙門氏菌分離株的PCR結(jié)果反映了ipaJ廣泛存在于雞白痢沙門氏菌中。本研究在國際上首次證實了ipaJ基因存在于雞白痢沙門氏菌中，但對其功能的了解還有待于更深入的研究。 3．雞白痢沙門氏菌mobA基因的克隆與表達雞白痢沙門氏菌與腸炎沙門氏菌抑制差減雜交文庫中片段PE30與豬霍亂沙門氏菌psfDlO mobil基因序列同源性達99％。根據(jù)GenBank上發(fā)表的mobA基

6、因序列，設計了一對引物從雞白痢沙門氏菌標準株533中擴增出片段約為1.6kb的序列，將此序列構建到原核表達載體pET-30a(+)和pGEMX6p-1上，再將重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化入宿主菌BL21(DE3)和BL21中，在37℃，0.5mmol/L IPTG誘導下，分別表達出分子量約為64KDa和84KDa的蛋白質(zhì)。將BL21(DE3)中的重組蛋白表達產(chǎn)物經(jīng)His純化柱回收后免疫小鼠，Western-blot試驗顯示免疫小鼠的血清與BL21中