1、背景與目的：
　　死亡時間( Postmortem Interval, PMI)推斷是法醫(yī)學界研究的重點和難點,其對兇犯的確定、刑事案件的偵破,以及死亡醫(yī)療糾紛,甚至遺產(chǎn)繼承的仲裁等司法審判實踐有著非常重要的意義。傳統(tǒng)推斷PMI的方法已有許多研究,包括根據(jù)早期尸體現(xiàn)象、胃內容物消化程度等多種方法推斷早期PMI;根據(jù)尸體腐敗程度、蠅蛆生長規(guī)律等推斷晚期PMI。但這些方法由于影響因素多、檢測方法繁雜等問題,均存在較大的誤差。近年來,較

2、多研究利用DNA和蛋白質降解的分子生物學技術推斷PMI,認為是比較準確可靠的方法,但其依然受到自身和外界多重因素的影響,且操作復雜,尚處于研究階段。
　　PMI推斷的研究,實驗條件的控制非常重要。本實驗在課題組其他成員的空氣中大鼠PMI研究基礎上,以水中尸體為研究對象,控制溫度、空氣流通度等實驗條件,期望探討水中尸體軟組織的生物力學性狀的時序性變化與PMI關系的規(guī)律,將法醫(yī)生物力學理論和技術引入到PMI推斷中,進一步豐富法醫(yī)生物力

3、學(forensic biomechanism)的研究內容和開拓PMI推斷新技術方法。同時,本實驗利用CDIA技術,觀測常規(guī)HE染色的肝細胞病理圖像并進行體視學分析與量化處理,結合水中尸體主要臟器的病理形態(tài)的系統(tǒng)觀察,期望為PMI推斷提供新思路和參考依據(jù)。
　　材料與方法：
　　清潔級健康雄性SD大鼠80只,3~3.5月齡,體重250-300g,頸脫位法處死,按死后不同時間點隨機分為0h、6h、12h、18h、24h、30h

4、、36h、42h、48h、60h、72h、96h、120h、144h、168h、192h共16組,每組5只。立即放置于2/3滿在GXZ型智能光照培養(yǎng)箱中25±0.5℃恒溫的自來水塑料桶,讓其自然腐敗,分別于上述時間點提取胸部正中皮膚1×4cm2、腹壁白線右側1cm處腹壁肌肉1×4cm2、直腸上4~10cm處結腸、胃下6~12cm處小腸進行生物力學指標檢測,每個時間點5只,檢測其極限載荷、最大應力、應變等軟組織生物力學指標。同時選取0h、

5、12h、24h、36h、48h、72h腦、心、肝、腎、肺切片HE染色并進行鏡下觀察,觀察各組織自溶腐敗的形態(tài)學變化,并對大鼠肝細胞進行病理學圖像體視學分析和量化處理,檢測肝細胞的核面積、核漿比、核漿光密度比和核異形指數(shù),用SPSS軟件進行統(tǒng)計學處理和分析,探討其形態(tài)時序性變化規(guī)律及其與PMI的關系。
　　結果：
　　1.主要臟器組織形態(tài)學改變
　　水中大鼠尸體經(jīng)尸僵、腐敗靜脈網(wǎng)、尸綠、腹部膨隆至塌陷約需8天。HE染色鏡

6、下觀察,各臟器均呈現(xiàn)時序性變化。腦0-24h神經(jīng)元細胞核固縮,24-48h核擴大至腦液化。心0-24h肌漿腫脹、肌間隙增寬,24-48h肌漿模糊、斷裂,肌細胞核明顯減少,48-72h心肌細胞核消失;肝0-24h肝細胞腫脹,24-48h肝細胞間隙變小至邊界不清,核固縮、碎裂,48-72h僅殘留少量細胞核碎片。腎0-24h近曲小管上皮細胞嗜酸性增強,24-72h腎小管、腎小球細胞核相繼固縮、碎裂、溶解消失,96h細胞核完全消失。肺0-24h

7、肺泡上皮細胞胞漿淡染,24-48h肺泡上皮細胞核固縮、碎裂、明顯減少,48-72h肺泡腔漿液淤積至肺組織完全破碎、結溝不清。各臟器比較,腦自溶、腐敗最快,肝、心、肺其次,腎自溶腐敗最慢。其中,腦48h即已液化無法取材切片,肝、心、肺72h組織結構基本消失,腎組織自溶腐敗速度較慢,96h細胞核基本消失,120h組織輪廓不清。
　　2.生物力學測試與分析結果
　　2.1.極限載荷
　　各組織極限載荷均值大小排序為:皮膚(1

8、4.71N)>大腸(3.96N)>肌肉(3.85N)>血管(1.97N)>小腸(1.27N)。
　　各組織總體均呈死后時序性下降趨勢,下降速度在各時間點存在差異。皮膚0-18h下降迅速(直線回歸方程為YPMI=33.087-1.3121XML,r=-0.999),相鄰點間差異顯著(P<0.01),18-36h、96-168h呈緩慢下降趨勢(YPMI=120.153-9.009XML,r=-0.965;YPMI=13.822-0.0

9、485XML, r=-0.941),P<0.05。36-96h、168-192h相鄰時間點差別不明顯(P>0.05)。肌肉0-24h、96-168h下降趨勢明顯,其直線回歸方程分別為YPMI=42.914-4.9861XML,r=-0.989;YPMI=177.6-24.289XML,r=-0.970。24-96h為“平臺期”,168-192h比較差異不明顯(P>0.05)。大腸0-36h、72-192h(YPMI=66.238-8.6

10、983XML,r=-0.981;YPMI=225.14-41.488XML,r=-0.978)下降趨勢明顯(P<0.05),36-72h為“平臺期”。小腸0-18h(YPMI=53.903-27.422XML, r=-0.968)、120-192h(YPMI=350.55-200.57XML,r=-0.986)下降趨勢明顯,18-120h為“平臺期”(P>0.05)。血管全程變化趨勢不明顯。
　　2.2.應變
　　血管應變最

11、大為3.96,但變化趨勢不明顯。小腸最小為0.34。皮膚、肌肉、大腸、小腸總體均呈下降趨勢。
　　皮膚0-48h下降迅速,YPMI=88.894-77.665XSR,r=-0.962(P<0.01)。48-192h為“平臺期”。肌肉0-30h下降迅速,YPMI=52.112-41.544 XSR,r=-0.970(P<0.01),30-192h
　　為“平臺期”(P>0.05)。大腸0-24h下降迅速,YPMI=59.106

12、-55.031XSR,r=-0.962。24-72h為“平臺期”,72-192h下降趨勢明顯(P<0.01),YPMI=307.03-346.59 XSR,r=-0.993。小腸0-24h下降迅速,YPMI=56.758-87.079 XSR,r=-0.949(P<0.01),24h-192h為”平臺期”。
　　3.肝臟細胞病理圖像量化處理
　　肝細胞核面積各時間段的差異沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　肝細胞核漿

13、比呈下降趨勢,其直線回歸方程為 YPMI=0.3683-0.0045XRKC,r=-0.9361。其中12-24h下降速率最大,0-12h、24-72h下降速度較慢。各相鄰時間點比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　核漿光密度比,0-36h呈逐漸上升趨勢(Y=69.751X-78.117,r=0.982),36-72h呈逐漸下降趨勢( Y=198.44-97.676X,r=-0.999),各相鄰時間點比較差異有統(tǒng)計學意義(P

14、<0.05)。
　　異形指數(shù)呈上升趨勢(YPMI=30.177XRKC-31.707,r=0.989),12-36h上升速度最大,其次為0-12h(P<0.05),48-72h差異不明顯(P>0.05)。
　　結論：
　　1、水尸各器官組織形態(tài)的時序性變化與 PMI之間存在明顯的相關性,其主要為自溶和腐敗的結果,與空氣中尸體比較,自溶和腐敗約晚12小時,提示日常法醫(yī)病理學檢驗時,應注意鑒別生前彌漫性病變與死后自溶腐敗性

15、變化,還應綜合考慮尸體腐敗環(huán)境。水尸72h內為自溶、腐敗高峰期,應爭取盡早尸檢或冷凍保存尸體。
　　2、水尸皮膚、肌肉、小腸和結腸各器官組織的生物力學性狀存在時序性變化規(guī)律,特別是各自均存在一段明顯的線性相關的“窗口期”和相互彌補性,提示軟組織生物力學指標及其檢測方法可以作為推斷死亡時間的一種簡便、客觀、量化的檢測手段。
　　3、病理學圖像量化分析技術檢測的常規(guī)HE組織細胞各種描述指標,可以量化地反映死后組織細胞自溶腐敗的形