1、為了能制備出轉染效率高、細胞毒性小的基因載體,本文對非磁性及磁性陽離子脂質體作為基因載體進行了初步研究. 陽離子脂質體的轉染效率和細胞毒性主要取決于陽離子脂質體中陽離子脂質分子.本文以BOP為偶聯(lián)劑,通過柱層析分離提純,成功合成了三種陽離子脂質分子膽酸/賴氨酸一代偶聯(lián)物(CA-Lys)、膽酸/懶氨酸一代偶聯(lián)物(CA-Lys-Lys<,2>)及十八胺/賴氨酸偶聯(lián)物(OA-Lys).<'1>HNMR、MS分析表明,各產(chǎn)物的結構與所

2、設計的目標分子的結構是一致的. 在此基礎上,以上述三種陽離子脂質為原料,制備了一系列的陽離子脂質體和磁性陽離子脂質體,并且對其形貌、粒徑、Zeta電位、與DNA的相互作用以及細胞毒性進行了測試.TEM和粒徑分析表明,三種陽離子脂質體和磁性陽離子脂質體的形貌都呈球形,平均粒徑在110-140nm之間.Zeta電位測試表明,CA-Lys、CA-Lys-Lys<,2>及OA-Lys的加入能使脂質體的表面帶正電.凝膠電泳分析表明,CA

3、-Lys和OA-Lys兩種陽離子脂質體在N/P為5:1時,能和DNA形成復合物,但不完全,CA-Lys-Lys<,2>陽離子脂質體在N/P為2:1時,能和DNA完全形成穩(wěn)定的復合物.MTT實驗表明,CA-Lys、CA-Lys-Lys<,2>和OA-Lys是毒性較小的陽離子脂質分子. 陽離子脂質體的毒性主要來自于小分子陽離子脂質分子.為了減小毒性,本文還采用了生物相容性好的陽離子大分子殼聚糖(CS)及其衍生物氧羧甲基殼聚糖(OC

4、M-CS)、N-16烷基殼聚糖(16-CS)和N-賴氨酸殼聚糖(Lys-CS)對脂質體和磁性脂質體進行表面改性,從而得到陽離子脂質體和磁性陽離子脂質體.CS、OCM-CS、16-CS和Lys-CS表面改性的脂質體和磁性脂質體的粒徑有所增加,表面電性由負電變?yōu)檎?凝膠電泳分析表明,CS、OCM-CS和16-CS表面改性的脂質體與DNA質量比為10:1時能形成穩(wěn)定的復合物,Lys-CS表面改性的脂質體與DNA質量比為2:1時能形成穩(wěn)定的復