1、氬氦冷凍消融（argon-helium cryoablation）是影像設備引導或直視下探針到達目標組織，利用焦耳-湯普森效應（Joule-Thomson effect），在通過探針引導輸送的液態(tài)氬氣轉(zhuǎn)變?yōu)闅鈶B(tài)時迅速吸收熱量使局部溫度瞬間降至-160℃，對組織進行物理凍融損傷效應的治療手段。接受冷凍的組織細胞在極度低溫下出現(xiàn)代謝途徑受阻，細胞膜的脂質(zhì)層轉(zhuǎn)化為半固態(tài)，細胞骨架微管網(wǎng)絡出現(xiàn)破壞，進而使細胞暴露于高滲透壓環(huán)境而出現(xiàn)壞死或細胞內(nèi)

2、不規(guī)則的冰晶形成并通過膨脹、擠壓、研磨等物理作用造成細胞器損傷而導致細胞壞死及凋亡。細胞死亡后其封閉的內(nèi)在抗原出現(xiàn)暴露，罹患腫瘤的機體內(nèi)出現(xiàn)成熟抗原遞呈細胞（APC）捕獲抗原，并在各類不同的炎性因子和免疫相關(guān)細胞的輔助作用下呈遞并進一步激活免疫應答。從影像學或病理學可以明確看到氬氦冷凍消融的物理效應，但是免疫學改變?nèi)源嬖诓糠譅幾h，各種相互矛盾的觀點同時存在。本研究就是為了觀察在活體組織中，氬氦冷凍融時物理作用起效后組織細胞的凋亡及其比例

3、變化，以及機體細胞免疫性免疫指標是否出現(xiàn)波動，進而明確氬氦冷凍消融后機體的免疫功能狀態(tài)，為氬氦冷凍消融技術(shù)臨床應用提供切實的理論依據(jù)。
　　第一部分氬氦冷凍消融在惡性腫瘤模型的療效研究
　　目的：通過氬氦冷凍消融與化療藥物局部注射對惡性膠質(zhì)細胞瘤致凋亡效果的對照研究，觀察在體情況下兩者對惡性膠質(zhì)瘤細胞的療效差異。
　　方法：
　?。?）人惡性膠質(zhì)瘤細胞U87經(jīng)皮種植于裸鼠右后肢背部皮下建模（n=24），腫瘤直徑≥

4、1.5cm時，經(jīng)影像學、病理學驗證后明確成功建模；
　　（2）將建模成功后荷瘤裸鼠，隨機分組，直視下局部經(jīng)皮氬氦冷凍消融或經(jīng)皮局部瘤內(nèi)注射順鉑注射液；
　?。?）3d后處死荷瘤裸鼠，對腫瘤組織進行TUNEL染色分別觀察兩組產(chǎn)生細胞凋亡的情況。
　　結(jié)果：
　?。?）兩組細胞凋亡整體分布區(qū)域存在不同，氬氦冷凍組細胞凋亡主要分布于R2區(qū)域，化療藥物注射組細胞凋亡主要分布于R1區(qū)域；
　　（2）兩組各相同區(qū)域間細

5、胞凋亡數(shù)量存在差別，p<0.05。但兩組間，總體凋亡數(shù)量未見統(tǒng)計學差異，P=0.153。
　　結(jié)論:
　　氬氦冷凍消融與化療藥物對惡性膠質(zhì)細胞瘤在局部相同區(qū)域造成的細胞損傷程度不同，其凍融后產(chǎn)生細胞凋亡分布的主要區(qū)域不同，這是引起后續(xù)機體免疫狀態(tài)改變的關(guān)鍵因素。
　　第二部分氬氦冷凍消融對晚期腫瘤患者的療效研究
　　目的：（1）觀察氬氦冷凍消融對晚期腫瘤患者免疫應答的影響；（2）氬氦冷凍消融治療晚期腫瘤的療效評估

6、。
　　方法：
　?。?）納入標準：①患者有明確病理診斷；②無免疫性疾病、重大心腦血管基礎疾??；③年齡38-69歲間；④KPS評分≥50分，預計生存期﹥3個月；⑤血常規(guī)、凝血和心肌酶檢查結(jié)果均在正常范圍內(nèi)，無難控制性大量腹水、胸水；⑥排除皮下轉(zhuǎn)移病灶，防止出現(xiàn)冷凍損傷后引起大面積不可逆的皮膚凍傷情況。
　?。?）研究例數(shù)：CT引導下對122例晚期肝癌（n=45）、腎癌(n=77)患者，共159個病灶進行氬氦冷凍消融治療

7、。
　　（3）檢測指標：用流式細胞儀檢測治療前2小時、治療后20小時患者外周血中CD3+、CD4+、CD8+T細胞亞群及CD4+T細胞/CD8+T細胞比例的變化。
　?。?）術(shù)后隨訪：術(shù)后對患者近期療效和無疾病進展生存期進行隨訪，并完成生存分析。
　　結(jié)果：
　?。?）冷凍消融后患者外周血CD3+、CD4+T細胞與CD3+、CD8+T細胞的百分比均較治療前明顯升高，配對t檢驗顯示二者變化均有統(tǒng)計學意義，p<0.0

8、5。
　　（2）CD4+T細胞/CD8+T細胞的比值較治療前平均升高0.130，但p值為0.069未表現(xiàn)出統(tǒng)計學差異。
　?。?）晚期肝癌組近期總有效率達46.7％。晚期腎癌組近期總有效率達44.2%。晚期肝癌患者KPS評分治療后較治療前有明顯的提高P=0.033。晚期腎癌患者KPS評分治療后較治療前略有改善，P=0.205，未見統(tǒng)計學差異。
　?。?）兩組患者術(shù)后無疾病進展生存時間隨訪結(jié)果，晚期腎癌組隨訪時間為12個