蚯蚓纖溶酶Efp-0和Efp-Ⅱ基因的克隆與表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、蚯蚓纖溶酶(earthworm fibrinolytic enzymes,EFE)是一類在蚯蚓體內分離到的具有纖溶蛋白作用和激活纖溶酶原作用的蛋白質,具有抗凝、纖溶和溶栓作用,可以作為溶栓藥物治療因血栓引起的各種疾病。在其分子生物學研究方面,國內外學者分別在GenBank中遞交了24條核酸序列和31條蛋白質序列(24條通過核酸序列翻譯所得,7條是直接報道的部分蛋白質序列)。根據N-末端氨基酸序列比對,這些序列與Mihara H報道的4組

2、EFE(F-Ⅰ-0、F-Ⅰ、F-Ⅱ、F-Ⅲ)中的3組一致或相似性極高,但與F-Ⅰ-0組分序列一致的核酸序列此時尚未見報道。
   本實驗前期已經利用DNAMAN軟件,從正蚓科(Lumbricidae)的dbEST中獲得該組分的核酸序列信息,電子克隆得到一個EfP-0的序列,根據該序列設計特異引物,經過RT-PCR反應成功地從赤子愛勝蚓(Eisenia foetida)中克隆到一條蚯蚓纖溶酶新基因,命名為Efp-0。Efp-0基因

3、全長678bp,編碼225個氨基酸的成熟肽,屬絲氨酸蛋白酶,胰蛋白酶家族,與F-Ⅰ-0組分的氨基酸組成非常接近。BLAST證明Efp-0與已報道的蚯蚓纖溶酶基因之間的相似性均低于40%,因此為蚯蚓纖溶酶中的一個新基因,Genbank登錄號為DQ836917。構建了pMAL-c2x-Efp-0重組質粒,在E.coli TB1中獲得融合蛋白MBP-EfP-0的可溶性表達,表達產物有酪蛋白平板及纖維蛋白平板溶解活性。
   根據Gen

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