1、背景:
　　NMDA受體為一種離子型谷氨酸鹽受體，由2個NR1(NMDA receptor1)亞基和2個NR2(NMDA receptor2)亞基組成。其中NR2亞基包含四個亞型（NR2A、NR2B、NR2C、NR2D）。既往研究表明NMDA受體在IBS患者腸粘膜表達增高并參與IBS內臟高敏感的發(fā)生。然而哪種NMDA受體亞型在該機制中起關鍵作用目前尚不清楚。在本研究中，我們將探討NMDA受體亞型在IBS-D患者內臟高敏感中的作用。

2、然而NMDA受體并不能直接誘導內臟高敏感，需要借助受體活化后的產物。
　　腦源性神經生長因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)具有多種功能，在神經系統(tǒng)神經細胞的生存，突觸的可塑性和疼痛的產生中發(fā)揮重要作用。既往研究表明，NMDA受體可誘導成熟BDNF(mature BDNF, mBDNF)的合成。因此，作為合成mBDNF的中間產物，前體BDNF(the precursor of bra

3、in derivedneurotrophic factor，proBDNF)也可由NMDA受體誘導產生。近期研究表明proBDNF表達于腸粘膜并具有促進炎癥性、內臟性、手術性疼痛的作用。本研究將探討proBDNF在內臟高敏感中的作用，并研究該N2亞型是否通過proBDNF參與內臟高敏感的發(fā)生。
　　近期一項研究表明腸粘膜NMDA受體通過誘導mBDNF的產生參與內臟高敏感，然該研究并未涉及亞基探討。因此我們將同時探討該亞型是否也通過

4、mBDNF參與內臟高敏感機制的發(fā)生。
　　目的:
　　1.探討NMDA受體哪種亞型在IBS-D患者腸粘膜表達增高并參與內臟高敏感的發(fā)生;
　　2.探討proBDNF在IBS-D患者腸粘膜表達情況及是否與IBS內臟高敏感相關;
　　3.探討NMDA受體該亞型是否通過proBDNF參與IBS-D內臟高敏感的發(fā)生;
　　4.探討該亞型是否通過mBDNF促進IBS-D內臟高敏感的發(fā)生。
　　方法:
　　

5、1.臨床試驗
　　根據(jù)羅馬Ⅲ標準納入IBS-D患者及健康對照者，每位參與者完成一份信息采集及腸道功能評分量表，進行腹部疼痛/不適嚴重程度及頻率評分。每位參與者進行結腸鏡檢查，于直乙交界處鉗取3塊腸粘膜標本，1塊用于免疫組化檢查，2塊用于western blot檢查。
　　2.細胞試驗
　　以人結腸上皮細胞系ht-29為研究對象，分別以MK-801阻斷NMDA受體以Ro25-6981特異性阻斷NR2B亞型。實時熒光定量R

6、T-PCR、western blot檢測proBDNF的表達，western blot、ELISA檢測mBDNF的表達。
　　為了研究NMDA受體活化后對proBDNF及mBDNF合成的直接作用，激動劑組分為5組，分別為50μ M NMDA與10μMD-絲氨酸組，100μ M NMDA與10μ MD-絲氨酸組，500μ M NMDA與10μMD-絲氨酸組，100μMNMDA組，10μM D-絲氨酸組，于3h、6h、12h、24h、

7、48h獲取細胞或培養(yǎng)基后進行后續(xù)實驗。為了評估NR2B亞基對BDNF合成作用的影響，分別用MK-801阻斷全部NMDA受體和Ro25-6981特異性阻斷NR2B亞基，比較兩者對proBDNF及mBDNF合成的影響。
　　3.統(tǒng)計學分析
　　兩組之間計量資料的比較均采用獨立樣本t檢驗方法，分類變量的比較采取Fisher確切概率法。多組樣本的比較采用單因素ANOVA分析，隨后組間的兩兩比較采用Tukey檢驗。NR2B與proBD

8、NF/mBDNF的相關性采取Pearson線性相關。proBDNF/mBDNF蛋白表達與腹部疼痛評估的相關性采取Spearman秩相關。P值小于0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1.臨床試驗
　　1) NMDA受體NR2亞基四個亞型均主要表達于腸粘膜腸上皮細胞;
　　2) IBS-D患者腸粘膜中，NMDA受體只有NR2B亞型表達增高，且與患者腹部疼痛/不適評分及頻率呈正相關;
　　3) IBS-

9、D患者腸粘膜中，proBDNF表達增高，且與腹部疼痛/不適嚴重程度評分及頻率呈正相關;
　　4) NR2B亞型表達與proBDNF的表達呈正相關;
　　5) IBS-D患者腸粘膜中，mBDNF表達增高，且與腹部疼痛/不適嚴重程度評分及頻率呈正相關;
　　6) NR2B亞型表達與mBDNF表達也呈正相關。
　　2.細胞試驗
　　在ht-29細胞，激動NMDA受體后可引起proBDNF和mBDNF表達增高，且p