1、紅樹(shù)林是熱帶海岸潮間帶的木本植物群落,其生境具有不同于海洋和陸地的性質(zhì),地下生態(tài)系統(tǒng)較之其他環(huán)境有很大的不同,蘊(yùn)藏著巨大的微生物資源。生存于紅樹(shù)林土壤的放線菌,其次級(jí)代謝產(chǎn)物在結(jié)構(gòu)類型以及生物活性方面都呈現(xiàn)出與陸生放線菌不同的特點(diǎn)和多樣性,作為生物活性物質(zhì)來(lái)源也越來(lái)越受到重視。紅樹(shù)林枯枝落葉中含有大量的纖維素和木質(zhì)素,因此,有關(guān)真菌纖維素和木質(zhì)素分解酶的研究較多,但對(duì)放線菌產(chǎn)生的降解酶類的研究相對(duì)較少。 本文從漳州紅樹(shù)林自然保護(hù)

2、區(qū)的七個(gè)土壤樣品中,選用五種選擇性分離放線菌的培養(yǎng)基,共分離得到放線菌286株,但分離的放線菌中90％為鏈霉菌屬的菌株。通過(guò)16SrDNA序列的同源性比較發(fā)現(xiàn)了其中有三株潛在的鏈霉菌屬的新種,運(yùn)用現(xiàn)代多相分類鑒定研究方法,對(duì)潛在新種進(jìn)行了形態(tài)學(xué),生理生化特征,化學(xué)分類特征及分子分類的鑒定,確定了三株鏈霉菌的分類地位,并將其中一株鏈霉菌MGR035命名為廈門(mén)鏈霉菌(Streptomyces xiamenensis sp.nov.)作為鏈霉

3、菌屬的新種進(jìn)行了描述。 通過(guò)采用含有纖維素、半纖維素的篩選平板對(duì)分離得到的152株放線菌進(jìn)行了產(chǎn)酶菌株的初篩,發(fā)現(xiàn)有50％的菌株對(duì)纖維素、半纖維素有不同程度的降解能力,有9株鏈霉菌的酶活性較高。對(duì)其中三株菌株的酶活特性進(jìn)行了初步測(cè)定,發(fā)現(xiàn)所產(chǎn)的纖維素、半纖維素酶均屬中溫、中性酶,酶反應(yīng)最適溫度在50-60℃、最適pH值為6-7。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了兩對(duì)兼并引物,PCR擴(kuò)增獲得了兩株高產(chǎn)酶鏈霉菌的半纖維素酶核心區(qū)序列,利用反向PCR技術(shù)克

4、隆得到了菌株Streptomyces sp.zxy19和Streptomyces sp.s6-204的230個(gè)氨基酸的木聚糖酶和530個(gè)氨基酸的甘露聚糖酶基因,分別與糖基水解酶家族11和5的成員具有約80％的氨基酸序列同源性。隨后構(gòu)建了酶基因在大腸桿菌中的原核表達(dá)載體,實(shí)現(xiàn)了重組酶基因的可溶性表達(dá),并進(jìn)行了酶活性的檢測(cè)。初步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)克隆的甘露聚糖酶基因氨基酸序列與同一酶家族的其它酶基因氨基酸序列相比,其開(kāi)放閱讀框N端多出100個(gè)氨基酸,